肝癌特异性染色体17p13.3杂合性缺失区中新基因HC63R转录调控机制

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HC63R基因(GeneBank登录号:AF246287)是在肝癌高杂合性缺失(LOH)17p13.3区域内定位克隆到的一个重要基因。该基因全长近300kb,含有18个外显子,其cDNA长2,078bp,包含有2022bp的开放阅读框,编码含673aa的蛋白产物。前期的工作中发现该基因的cDNA产物有很强的抑制细胞生长功能。 为了探讨该基因在转录水平的基本调控机制,并分析该基因的转录调控与肝癌发生的关系,对HC63R基因的转录调控机制进行了以下的研究:1.通过尘物信息学分析预测潜在的可能调控HC63R基因启动子活性的转录因子;2.瞬时转染/双荧光素酶报告系统对这些转录因子对启动子活性的影响进行分析;3.针对蛋白和关键顺式元件的结合的特异性和能力,开展电泳迁移率改变检测法和抗体介导的超迁移分析。 在对HC63R基因的转录调控机制和DNA甲基化对启动子活性影响的研究过程中,发现:1.经生物信息学分析提示+l-+40bp区域很可能含有ETS家族、NF-KB家族和p53蛋白等转录因子所识别的DNA序列:2.瞬时转染/体外双荧光素酶报告实验证实ETS家族转录因子ETS-1、ETS-2和Elf-1可以显著提高HC63R基因启动子活性,而p53则对其有明显抑制作用,NF-KB家族转录因子对HC63R基因启动子活性没有明显影响;3.电泳迁移率改变检测结果证实ETS家族转录因子ETS-2能够特异性的与HC63R基因启动子+1-+40bp片段结合。
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