采用手握法采集成年大约克种公猪精液,收集中段富含精子部分,配制不同的稀释液,在不同条件下进行冻前预处理,再用不同的解冻液和解冻方法进行解冻,然后进行人工授精试验;同时,还对冷冻前后精液中细菌含量与种类和低温保存猪精液进行了研究。结果如下: 1.在使用的 7 种稀释液中,5、6 号稀释液优于其它 5 种(P<0.05),其冻后活率分别达 0.46,0.50(0.5ml 颗粒)和 0.40,0.49(0.5ml 细管),精子复苏率分别是 76.7%,74.6%(0.5ml 颗粒)和 70.5%,78.3%(0.5ml 细管),且两者差异不显著(P>0.05);同种稀释液之间,颗粒与细管冻精的差异不显著(P>0.05)。以颗粒冻精按不同的始冻温度、平衡温度、入氮温度制定了始冻温度与冻后活率的关系曲线和冷冻温度曲线。 2.对新鲜精液在离心前静置不同时间,选择不同的离心速度,离心时间及不同的精清留量等进行冷冻前预处理。结果表明:离心前在 37℃环境下静置 60min,其冻后效果(0.5ml 细管精液冻后活率达 0.50,复苏率 75.8%,颗粒精液 0.5ml 冻后活率 0.48,复苏率 72.5%,0.1ml 活率 0.47,复苏率 70.6%)优于30min和 90min(P<0.05);离心过程以 1000r/min 的速度离心 10min 较好(0.5ml 细管精液冻后活率 0.48,复苏率 76.8%,0.5ml 颗粒精液冻后活率 0.46,复苏率 73.5%,0.1ml 颗粒冻后活率 0.44,复苏率 69.4%),优于 500r/min 和 1500r/min 分别离心 7min 和 13min(P <0.05);精清留量以精清/精液(体积比)等于 1/1时较好,优于 1/2 和 0/1(P <0.05)。 3.对五种不同的冷冻保护剂(甘油、DMSO、乙二醇、Tris、OEP)和五种自行设计的解冻液配方以及解冻方法进行对比。结果表明:甘油为最佳的冷冻保护剂(P<0.05),其最适宜浓度为 3%(P<0.05),冻后活率最高可达 0.48;不同冷冻保护剂对精子的毒性大小依次为:乙二醇>DMSO>OEP>Tris>甘油;4号解冻液和精清的解冻效果明显好于其它三种解冻液(P<0.05),而两者之间无明显差异(P>.05),但以 4 号解冻液在冻后活率方面稍高于精清;解冻方法以在 75℃下,4s 解冻效果较好(活率 0.47,顶体完整率 55.6%,精子畸形率 18.32%)。 4.采用自制冷冻稀释液和解冻液配方,对自制的颗粒冻精和细管冻精进行人工授精试验。结果表明:在有效存活时间和冻后活率上,颗粒冻精与细管冻精之间差异不明显(P>0.05);而颗粒冻精的受胎率和窝均产仔数要好于细管冻精,分别为颗粒冻精:81.81%,85.71%,9.22 和 9.33 头,细管冻精 75.00%,80.00%,8.17 和 8.25 头。 5.原精中细菌菌落数量平均为 1.5×104个/ml,平衡后精液中细菌菌落数量平均为 1.1×104个/ml;颗粒冷冻精液中:0.1ml 含细菌菌落数 920 个,0.5ml 中有 3750 个;细管冷冻精液中:0.25ml 细管含细菌菌落数量 1060 个,0.5ml 细管含细菌菌落数 1520 个。细菌经培养、染色后镜检,从外形上初步确定有葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等。 6.用 5 种不同的低温保存稀释液按不同比例稀释,在 0℃～5℃的低温环境下保存。结果表明:2 号稀释液的有效保存时间达 60±4.05h,与其它四种稀释液比较,差异极显著(P<0.01),猪精液低温保存离心速度以 1000r/min 的离心效果较好,有效保存时间达 50±3.68h(P<0.05),同种稀释液不同比例稀释,精液与稀释液按 1:1 的比例稀释,效果较好(P<0.05)。