稻瘟病是水稻重要的病害之一,可造成大幅度减产甚至绝产,对全世界的粮食安全构成了威胁。miRNAs是植物生长发育过程中非常重要的调控因子,调控着一系列的生物过程,包括生长,发育,应对各种生物和非生物胁迫等。实验室在前期工作中,分别对水稻抗病材料IRBLkm-Ts和感病材料LTH接种稻瘟病菌,通过对小RNA文库进行深度测序,鉴定出了 30多个可能参与水稻对稻瘟病菌免疫反应的miRNAs。本论文中,我们选取了其中的miR169做研究对象,分别构建过表达材料以及模拟靶标过表达材料,接种稻瘟病菌,然后进行一系列抗病性鉴定,证明miR169是水稻对稻瘟病菌免疫应答的负调控因子。主要结果如下:(1)对水稻抗病材料IRBL9-W和感病材料LTH接种稻瘟病菌,然后检测miR169家族累积量的变化模式,发现受稻瘟病菌侵染后,miR169在水稻感病材料中的累积量显著上升,而在抗病材料中的累积量则变化不大。(2)对miR169a过表达转基因株系接种不同稻瘟病菌株,结果发现转基因水稻严重感病;进一步检测发现过表达miR169a抑制了防御相关基因PR1,PR10,NAC4和KS4的表达,并且H2O2的累积被显著抑制。通过接种带有GFP荧光标记的稻瘟病菌株,用荧光显微镜检测发现过表达miR169a可以促进稻瘟病菌对水稻早期的侵染。(3)在miR169a及其模拟靶标的过表达转基因株系中检测了 miR169靶基因的表达量,结果表明过表达miR169a会在转录后水平抑制其靶基因NF-YAs的表达;相反,过表达miR169模拟靶标会导致靶基因的上调表达。构建miR169靶位点的YFP荧光报告基因系统,然后与miR169及其模拟靶标在烟草中瞬时共表达,结果表明miR169a会抑制其靶基因NF-YAs的翻译。(4)构建了 miR169a模拟靶标的转基因材料,并对该转基因株系接种稻瘟病菌,结果表明过表达miR169a模拟靶标增强了水稻对稻瘟病菌的抗性。(5)对水稻抗病材料IRBL9-W和感病材料LTH接种稻瘟病菌,然后检测miR169靶基因NF-YAs的表达模式,发现受稻瘟病菌侵染后,靶基因NF-YAs在LTH与IRBL9-W中呈现出不同的表达模式。以上结果证明miR169通过不同程度地抑制其靶基因的表达,从而负调控水稻对稻瘟病菌的免疫。