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目的 哺乳动物TFF家族包含三个成员:TFF1(Ps2),TFF2(解痉肽)和TFF3(肠三叶因子),其共同的特征为二级结构中含有三叶草形状的结构域,这种特殊的结构使整个肽链扭曲、折叠,具有较强的抗酸、耐热及抗蛋白酶水解的能力。TFFs主要在哺乳动物的消化道中表达,在黏膜防御、修复和再生等过程中发挥重要作用。研究表明,在炎症、癌症等病理状态下,TFF3的表达多为上调。TFF3在肿瘤发生过程中参与细胞生长、迁移和改变细胞间粘连,与肿瘤细胞的浸润及转移相关。 Twist基因是最早在果蝇中发现的一种碱性螺旋-环-螺旋结构的转录因子,有研究发现,在人类多种恶性肿瘤的细胞株及组织中,均可检测到Twist的表达。Twist具有癌基因的特征,能编码凋亡抑制蛋白并参与肿瘤细胞的抗药性机制,在人类肿瘤的发生、发展和复发中具有重要作用。本小组前期数据显示在IEC细胞中TFF3过表达情况下,Twist分子的表达上调。 细胞自噬可以帮助细胞清除和降解受损、衰老以及失去功能的细胞、细胞器及变性的蛋白等大分子,为细胞提供循环能量。细胞自噬与肿瘤的关系密切,在不同的肿瘤中自噬的活性各异,此外在肿瘤发生发展的不同阶段,自噬的活性也不尽相同。在多数肿瘤细胞中,自噬的活性降低,但是在结直肠癌细胞中,自噬保持了较高的活性。 本研究意在探讨TFF3高表达对IEC自噬生物学特性的调节作用,初步探讨TFF3与自噬相关的分子机制,以期为TFF3异常高表达的炎性相关肿瘤的研究提供新靶点。 方法 1、构建实验相关质粒。 2、WesternBlot技术检测TFFs和Twist作用下自噬相关分子LC3B和Atgs的表达。 3、激光共聚焦技术进一步证实TFF3调节LC3B的表达。 4、RT-PCR技术和WesternBlot技术检测TFF3和Twist调节mTOR的表达。 结果 1、成功构建了真核表达载体pCMV-Flag-TFF1等。 2、TFF1、TFF2和TFF3参与调节自噬水平的变化。 3、Twist介导TFF3诱导细胞自噬。 4、TFF3和Twist调节自噬信号分子mTOR表达下调。 结论 IEC细胞中,TFFs对自噬具有调节作用。Twist介导TFF3对自噬的诱导作用。TFF3抑制mTOR表达参与细胞自噬。