Wnt信号通路可以分为经典型和非经典型两种。Wnt5a为非经典Wnt信号通路的典型代表蛋白,在各种器官的发育中发挥重要作用。在非洲爪蟾中,过表达Wnt5a会导致复杂的畸形,包括神经前管的不完全闭锁和前后轴的缩短。Wnt5a能够调节斑马鱼原肠作用胚胎期细胞的形态和集中延伸,在原肠作用后期调节细胞的伸长。Wnt5a可以调节小鼠中海马神经元线粒体的裂变聚变。涡虫是扁形动物门的典型代表,具有许多生物演化进程的过渡性特征,是研究生物进化和发育所不可或缺的重要环节。本研究利用RT-PCR(reverse transcription PCR)和RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆并分析了DjWnt5a基因序列,结果表明,DjWnt5a基因由1523 bp组成,编码371个氨基酸,其中含有保守的23个半胱氨酸结构域。利用MAGE 5.2构建进化树分析发现,东亚三角涡虫与地中海涡虫的Wnt5a聚群,并位于两侧对称动物的基部,可能是Wnt5a的原始类型。利用整体原位杂交技术分析DjWnt5a基因的表达谱,结果显示DjWnt5a基因在涡虫胚胎发育的第三阶段开始表达,主要集中在胚胎咽及胚带;随着胚胎发育直至完全孵化出的幼虫,DjWnt5a基因逐步表达在神经原基和中枢神经系统。由此推断,东亚三角涡虫DjWnt5a基因在涡虫胚胎发育时,参与神经原基的形成和分化,是涡虫胚胎神经发育必不可少的基因之一。同时还分析了DjWnt5a基因在整体和再生涡虫中的表达,显示DjWnt5a基因在成虫的脑神经节、腹神经索以及咽部表达,再生过程中在脑原基和神经系统以及咽原基表达。由此推断,东亚三角涡虫DjWnt5a基因在再生过程中可能参与脑与咽的形成。利用RNAi技术下调涡虫DjWnt5a基因,利用神经marker SYNORF1进行荧光免疫组化实验结果显示DjWnt5a RNA干扰使涡虫的神经系统无法正常再生,涡虫脑神经节的再生时间无法与正常涡虫的再生时间相对应。利用显微注射dsRNA技术干扰涡虫,分别提取对照组和干扰组涡虫的总RNA,利用qPCR检测非经典Wnt信号通路相关基因的表达情况,包括DjJnk、DjRac、DjRhoA、DjROCK。结果发现,当DjWnt5a基因的表达量下降时,与其相关的DjJnk、DjRac、DjRhoA、DjROCK的表达量也下降,并且DjRhoA的表达量下降最高。说明DjWnt5a基因是通过调节非经典Wnt信号通路中的DjJnk、DjRac、DjRhoA、DjROCK基因在涡虫中发挥作用的。构建了PET28a-DjWnt5a原核表达载体,通过IPTG诱导DjWnt5a融合蛋白表达,并利用Western Blot检测,结果表明成功诱导表达出DjWnt5a蛋白,为在蛋白水平上更加深入的研究DjWnt5a的性质及其在涡虫稳态和再生过程中的功能做了铺垫。