红花羊蹄甲组织培养及植株再生体系的研究

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本研究以红花羊蹄甲(Bauhinia blakeana)当年生幼嫩带芽茎段、叶片和叶柄为试验材料,通过正交实验设计结合方差分析,探讨了红花羊蹄甲离体培养的关键影响因素,存在问题及解决方法,对红花羊蹄甲无菌苗诱导、茎段和叶片、叶柄愈伤组织诱导及分化、壮苗生根、炼苗与移栽等方面进行了研究,以得到最佳培养配方及培养程序,从而为建立红花羊蹄甲的快繁体系、工厂化生产提供理论与技术依据。通过组织培养技术研究得出:①红花羊蹄甲外植体组织培养最佳取材时间为3月,启动率高,污染率相对其它时期较低,茎段、叶片和叶柄的启动率分别为91.6%、81.8%和89.5%,污染率分别为21.6%、19.3%和19.6%。②用0.1%的升汞灭菌,茎段的最佳灭菌时间为8 min,叶片为4 min,叶柄为6 min。③初代培养:茎段培养以MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+IBA 0.5mg·L-1为最适宜培养基配方,启动率高达91.4%,愈伤组织诱导率81.2%,出芽指数1.8;叶片愈伤组织诱导培养以MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+2,4-D0.1 mg·L-1为最适宜培养基配方,愈伤组织诱导率为75.6%;叶柄愈伤组织诱导培养以MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+2,4-D 0.05 mg·L-1为最适宜培养基配方,愈伤组织诱导率为71.8%。④继代培养:适宜于芽继代增殖培养的最优组合是MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1,增殖倍数达3.7,有效苗数2.7;适宜于茎段愈伤组织继代增殖培养的最优组合是MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+2,4-D 0.5mg·L-1,增殖倍数达4.4;适宜于茎段愈伤组织分化培养的最优组合是MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1,分化率达85.9%。⑤有效苗的培养:以MS培养基为最适宜培养基配方,植株生长健壮,有效苗率为85.9%。⑥生根培养:以MS+IBA 1.0 mg·L-1为最适宜培养基配方,植株生长健壮,生根率最高,达76.8%,平均根数最多,为3.3条,平均根长为5.1 cm。⑦移栽与炼苗:炼苗基质以蛭石、珍珠岩、河沙以1:1:2的比例效果最好,成活率较高,达到73.5%,且植株长势良好。
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