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研究背景：子宫肌瘤是妇女疾病中最常见的良性肿瘤，接近一半35-49岁妇女患有子宫肌瘤。子宫肌瘤的发生经常伴随长期、大量的类似月经期的出血，所以会引起中度贫血。此外，一些病例报道子宫肌瘤还会出现中度到重度的疼痛。子宫肌瘤压迫导致骨盆不适，肠道和膀胱功能障碍也是非常普遍的现象。更严重的是，会影响生育，比如不孕及习惯流产。子宫肌瘤在怀孕期间生长速度非常快，并有可能引起阻塞分娩被迫进行剖腹产，除产后出血外，也可能出现胎儿异常先露和胎儿异常。这些临床并发症严重影响了妇女的健康。虽然临床和生物学研究一直以来都认为雌激素是促进子宫肌瘤增长的重要因素，但越来越多的证据表明孕激素与子宫肌瘤的发病机理也息息相关。这说明子宫肌瘤是雌激素和孕激素依赖性的良性肿瘤。雌激素受体（ER）和孕激素受体(PR)在雌激素介导的致癌过程中都发生了重要的调控作用，影响了子宫肌瘤细胞的生长。MicroRNA (miRNA)是一种大小约21-23个碱基的非编码单链小分子RNA，在生物体内发挥重要作用，包括细胞增殖，凋亡，应激反应和肿瘤发生。最近研究显示miRNA在多种肿瘤中的表达水平发生了变化，可能在某些肿瘤的发生中发挥了重要作用。研究认为miRNA水平的变化常导致其靶基因的表达异常，从而影响了肿瘤的进程。许多肿瘤都涉及到了miRNA的变化，并且其变化程度还与肿瘤的分型分级以及预后密切相关，这提示我们在肿瘤发生发展中所发挥重要作用的miRNA极有可能作为肿瘤治疗的新型分子靶标。Mir-26a在癌变过程中的作用非常复杂，它既可作为癌基因，也能够成为抑癌基因，例如其在成胶质细胞瘤和肝癌中的作用恰好相反。在这里我们将子宫肌瘤中ERα、PRa的表达调控和miRNAs联系起来进行研究。通过TargetScan分析软件发现mir-26a于ERα、PRa的3’UTR区存在潜在的结合位点。因此我们选择mir-26a进行深入研究，进一步通过实验验证mir-26a对ERα、PRa表达的调控作用并进一步揭示其对子宫肌瘤发生、发展的潜在影响。研究方法及结果：1、实时定量PCR、原位杂交检测mir-26a在子宫肌瘤组织和其相应子宫肌层组织中的表达情况：收集15例子宫肌瘤病人的子宫肌瘤组织和相应正常子宫肌层组织，运用RealtimePCR检测mir-26a在这15例子宫肌瘤和其相应子宫肌层组织中的表达情况，发现在13例中，子宫肌瘤组织中的mir-26a呈明显低表达。接着，用形态学方法，采用原位杂交检测15例子宫肌瘤患者的子宫肌瘤组织和相应子宫肌层组织中mir-26a的表达差异，光镜下观察，发现15例病人标本的子宫肌瘤组织中mir-26a表达均明显低于其在相应子宫肌层组织的表达。2、采用免疫组化方法检测子宫肌瘤组织及其相应正常子宫肌层组织中ERα、PRa和一些周期和增殖指标：随机选择长海医院妇产科15例经临床诊断和病理诊断证实为子宫肌瘤的病人，年龄33~54岁，前一周内均未接受雌、孕激素及其它激素治疗。采用免疫组化法对这15例患者的子宫肌瘤组织和相应正常子宫肌层组织内的ERα、PRa、Ki67、PCNA、CyclinD2和CyclinE2进行检测，结果显示，在15对标本中，子宫肌瘤组织和其相应子宫肌层组织中均含有ERα、PRa、Ki67、PCNA、CyclinD2和CyclinE2，肌瘤组织和肌层组织之间的ERα、PRa、Ki67、PCNA、CyclinD2和CyclinE2四个检测指标阳性率均有明显差别，肌瘤组织中的ERα、PRa、Ki67、PCNA、CyclinD2和CyclinE2均高于相应正常肌层组织。3、原代培养子宫肌瘤平滑肌细胞，在细胞水平验证mir-26a对ERα、PRa的调控作用：用长海医院妇产科取得的子宫肌瘤病人新鲜标本进行原代培养，成功建立人子宫肌瘤平滑肌细胞系，为后续实验奠定基础。利用TargetScan分析软件预测出ERα、PRa为mir-26a的潜在靶基因，并找出含mir-26a结合位点的ERα、PRa的3’UTR区片段，分别克隆插入结构质粒PmirGLO的绿色荧光蛋白编码区下游，构建出新的报告基因载体。引入双荧光素酶报告基因系统进行验证，验证出ERα、PRa为mir-26a的靶基因。在此基础上，将mir-26a的mimics转入子宫肌瘤平滑肌细胞中，使其高表达mir-26a，并设立对照，即转染NC的子宫肌瘤平滑肌细胞。用western blot检测mir-26a的靶蛋白ERα、PRa的表达水平，与对照相比，mir-26a的mimics转染量不同，ERα、PRa的蛋白水平不同程度下调。4、Mir-26a对子宫肌瘤平滑肌细胞周期和增殖的调节：为证实mir-26a对子宫肌瘤平滑肌细胞生物学功能的影响，我们将mir-26a的mimics转入子宫肌瘤平滑肌细胞中，使其高表达mir-26a，并设立对照，即转染NC的子宫肌瘤平滑肌细胞，用流式细胞仪分别检测在24h和48h时细胞周期的变化，发现在24h时，高表达mir-26a的细胞与对照组相比，细胞大量滞留在G0/G1期。此外，用cck-8试剂盒检测mir-26a对细胞增殖的影响，结果显示细胞种植后的第二天开始，高表达mir-26a的肌瘤平滑肌细胞增殖速度显著慢于对照组细胞。结论：1、子宫肌瘤组织中mir-26a的表达下调，揭示mir-26a的表达与子宫肌瘤之间具有相关性；2、较其相应的正常肌层组织，子宫肌瘤组织中ERα、PRa、Ki67、PCNA、CyclinD2和CyclinE2表达水平均升高，所以mir-26a和ERα、PRa、Ki67、PCNA、CyclinD2和CyclinE2的表达呈负相关，提示ERα、PRa、Ki67和PCNA、CyclinD2和CyclinE2的表达失调参与子宫肌瘤的发生和发展有关；3、成功建立子宫肌瘤平滑肌细胞原代培养方法，为进一步研究子宫肌瘤的功能奠定基础；4、构建出含有与mir-26a互补位点的ERα、PRa的3’UTR区的新报告基因质粒，并证实mir-26a参与ERα、PRa mRNA的转录后调控；5、高表达mir-26a的子宫肌瘤平滑肌细胞，ERα、PRa的蛋白水平下调，mir-26a显著抑制了ERα、PRa的蛋白表达量，进而有效抑制雌激素、孕激素对子宫肌瘤平滑肌细胞的促增殖作用，提示mir-26a可能成为一项重要的临床检测指标；6、mir-26a的表达水平与子宫肌瘤的增殖和周期密切相关，高表达mir-26a使子宫肌瘤平滑肌细胞周期被阻滞，增殖速度降低，抑制了细胞的分裂，大大减弱了子宫肌瘤平滑肌细胞的增殖能力。