L-亮氨酸对新生哺乳仔猪肠道发育及氨基酸转运影响的研究

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本研究通过体外细胞培养试验和体内饲养试验相结合探讨了L-亮氨酸对正常出生体重(NBW)新生仔猪和宫内生长受限(IUGR)新生仔猪性长、肠道发育以及氨基酸转运的影响。(1)试验一:L-亮氨酸对新生仔猪小肠上皮细胞增殖、氨基酸转运载体以及紧密连接蛋白表达的影响。试验以新生仔猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2)为研究对象,共设6个处理,分别用含有0、0.5、1、2、5和10:mmol/L L-亮氨酸的特殊培养基培养细胞24h。结果表明,L-亮氨酸能促进IPEC-J2氨基酸转运载体ATB0,’以及紧密连接蛋白ZO-1、ZO-2和Claudin-3的表达。5mmol/L L-亮氨酸促细胞生长最明显(P<0.05)。(2)试验二:灌服L-亮氨酸对新生仔猪生长的影响。试验选取胎次和出生日期相同的60头平均体重为2.84士0.02kg的7日龄NBW哺乳仔猪和60头平均体重为1.88士0.02kg的7日龄IUGR哺乳仔猪(杜×大×长),分别按照体重随机分为4个处理,每个处理5个重复,每个重复3头猪。试验中L-亮氨酸的添加量分别为母猪乳中亮氨酸的0%、100%、200%和300%,即0、0.7、1.4和2.1g/kg BW L-亮氨酸,每日灌服两次。同时,分别向各组添加适量L-丙氨酸以满足各组等氮饲喂。试验期2wks。结果表明,灌服L-亮氨酸可促进NBW仔猪小肠绒毛发育、提高血浆中亮氨酸含量以及NBW仔猪的生长性能(P<0.05);灌服L-亮氨酸对IUGR仔猪的生长性能具有负影响(P<0.05),降低了其血浆中血氨、尿素、葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇的含量(P<0.01),增加血浆中低密度脂蛋白含量。(3)试验三:灌服L-亮氨酸对新生仔猪肠道以及肾脏转运载体表达的影响。本试验组织来源于试验二。试验结果:NBW新生仔猪补充L-亮氨酸后,提高了空肠ATB00,+, b0,+AT, B0AT1mRNA表达,但是降低了空肠中y+LAT1mRNA表达水平。L-亮氨酸的补充也显著提高了NBW新生仔猪空肠中ATB0,+蛋白的表达(P<0.05),但是极显著降低了LAT2蛋白的表达(P<0.01)。L-亮氨酸的补充提高了IUGR新生哺乳仔猪空肠中ATB0,+基因的表达,但是降低了y+LAT1、ASCT2以及b0,’AT的基因表达(P<0.05)。L-亮氨酸的补充提高了IUGR新生哺乳仔猪肾脏中xCT蛋白的表达(P<0.05),但对ATB0,+、LAT2、PAT1、rBAT以及SNAT2蛋白的表达量无显著影响。(4)试验四:灌服L-亮氨酸对新生仔猪组织(肠道、骨骼肌、肝脏和肾脏)氨基酸的影响。本试验组织来源于试验二。L-亮氨酸补充提高了NBW哺乳仔猪背最长肌中甘氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸的含量(P<0.05),对其它氨基酸无影响。(5)试验五:灌服L-亮氨酸对新生仔猪骨骼肌中mTOR相关蛋白、蛋白降解以及肌肉生长相关基因表达的影响。本试验组织来源于试验二。L-亮氨酸的补充提高了哺乳仔猪骨骼肌mTOR信号通路相关蛋白的表达(P<0.05)。L-亮氨酸的补充显著降低了NBW哺乳仔猪腿肌MuRF1的1nRNA表达水平(P<0.05),提高了Myf5的mRNA表达水平(P<0.05),同时极显著提高了MyoD和MyoG基因的表达水平(P<0.01)。但是对Atrogin-1、MSTN基因的表达无明显影响(P>0.05);IUGR哺乳仔猪研究表明,L-亮氨酸的补充显著降低了腿肌中MuRF1的mRNA表达(P<0.05),同时极显著提高了Atrogin-1和Myf5基因的表达(P<0.01)。但是对MyoD和MyoG基因的表达无显著影响(P>0.05)。总之,试验结果表明,补充L-亮氨酸提高NBW新生仔猪的生长、肠道发育而对IUGR新生哺乳仔猪具有负面影响。L-亮氨酸添加对NBW及IUGR新生哺乳仔猪组织中氨基酸、氨基酸转运载体、蛋白合成降解相关基因的表达有影响,其作用机理及其与生长发育的关系,需进一步探讨。
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