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目的 多药耐药(multi-drug resistance，MDR)是导致白血病化疗失败的主要原因。MDR是指肿瘤细胞一旦对某种药物产生耐受，对其它结构、作用机制不同的化疗药物也交叉耐受。其产生主要有以下几方面原因：①以细胞膜上的能量依赖式外排泵介导的MDR如MDR1、MRP(多药耐药蛋白)；②以胞浆中酶介导的MDR如GSTs(谷胱甘肽S-转移酶)；③以细胞核核孔蛋白介导的MDR如LRP(肺耐药相关蛋白)；④以细胞核内酶介导的MDR如TOPOⅡ(拓扑异构酶Ⅱ)。其中MDR1是较为经典的耐药途径，对其机理研究得也较为透彻。但对非经典耐药途径如GSTs、TOPOⅡ等研究的尚少，尤其是GSTs与耐药的关系尚不很明确。 GSTs是一组与机体解毒作用有关的酶类，根据其在细胞内定位的不同，一般可分为胞浆α、μ、π(Pi)、θ及膜结合微粒体5种类型，其中，GST-Pi与恶性肿瘤关系最密切，约占其总数的90％。目前有关GST-Pi在急性白血病中的表达及与预后的关系尚有争议，GST-Pi、P-gp在白血病中表达的相关性报道不一。为了进一步明确GST-Pi与急性白血病(AL)多药耐药的关系及与P-gp表达的相关性，本实验采用免疫组化方法检测160例AL患者GST-Pi及P-gp的表达，同时应用Habig等的方法检测其中25例患者GST-Pi的活性。结果表明，复发/难治组GST-Pi和P-gp的表达明显高于初治/敏感组，二者在复发/难治组中的表达密切相关；P-gp与GST-Pi共阳性的患者预后极差，二者是影响急性白血病患者预后的重要指标；GST-Pi表达与活性高度正相关。 方法 一、细胞培养 卵巢癌细胞株OVCAR3和白血病细胞株K-562/D及K-562/S按本实验室常规培养，所有实验均采用对数生长期细胞。OVCAR3和K-562/D细胞分别作为GST-Pi和P-gp表达的阳性对照，K-562/S作为P-gp表达的阴性对照。 二、临床资料 AL患者160例，为我院1998年4月一2003年7月住院的患者，男95例，女55例，中位年龄41岁，均符合FAB诊断标准。其中急性髓细胞白血病(AML)104例，急性淋巴细胞白血病(ALL)50例。按治疗情况分为初治/敏感组92例，复发/难治组68例。对照组取自同期在本院就诊的10例良性血液病患者。按标准的诱导缓解方案进行正规化疗，复发/难治AML组选用MA、IA方案，复发/难治LL组选用大剂量MTX或Ara一C方案。 三、单个核细胞分离 取肝素抗凝骨髓3一5血(幼稚细胞>70%)，用Ficon密度梯度离心法分离单个核细胞。 四、GST一Pi表达的检测 应用免疫组化方法检测GST一Pi和P一gP的表达，以P一gP和GST一Pi表达阳性的幼稚细胞数分别>20%和25%分别判定P一gP和GST一Pi阳性。 五、GST一Pi活性的检测 用Habig等的方法测定GST一Pi活性。GST一Pi活性以每分钟每毫克胞浆蛋白与利尿酸/谷胧甘肤共扼的卿d数来表示(runol/mi可mg)。 六、统计学处理 采用x，检验、t检验和直线相关分析。结果 一、初治/敏感组与复发/难治组GST~Pi和P一gP表达的比较 GST一Pi和P一gP的总阳性率分别为40.6%(65/160)和53.1%(85/100);GST一Pi在初治/敏感组与复发/难治组中的阳性率分别是24 .5%(23/92)及62.4%(42/68);P-gP在初治/敏感组与复发/难治组中的阳性率分别是36.4%(34/92)及75.3%(51/68)，P值均<0.05，差异均有显著性意义。 二、GST-pi和P一gP的表达关系 对160例白血病患者仪汀.乃和P一的表达进行直线相关分析，结果发现初治/敏感组相关系数r=0.21，P>0.05;复发/难治组相关系数r二0 .75，P<0.05。 三、GST一R和P一gP的表达与临床疗效关系的比较 全部患者均经两个疗程标准化疗后评价疗效，以完全缓解(CR)为有效。CST一Pi表达阳性与阴性组的完全缓解率分别为26.2%(17/75)和78 .9%(75/85)，P<0.05;P-gP表达阳性与阴性组的完全缓解率分别为29 .1%(25/85)和89.3%(67刀5)，P值<0.05，二者均有显著性差异。P-gP与GST-Pi共阳性者与共阴性者的CR率分别为12.7%(7/55)和珍2.3%(印/65)，P<0.05，差别有显著性意义。 四、GST一Pi活性检测结果 正常对照组CST一Pi活性为10.12土5.41(nmol/而。/毗)，AML组g汀.Pi活性为38.61土10.巧(恤d/面n/mg)，川比组CS卜R活性为44.10土11 .62(nznol/min/mg)，AML组与ALL组CST书活性均明显高于正常对照组(P值均<0 .05);AML组与ALL组CST‘R活性无显著差异，P>0.05。 五、 GST一Pi表达与活性的关系 经线性相关分析发现，GST一Pi表达与活性呈高度正相关，r=0.71，P<0.05，其中有两例患者CST一R高表达低活性。结论 1 .GST一Pi和P一gP在AL复发/难治组中的表达明显高于初治组，二者在AL复发/难治组中的表达密切相关。 2 .GST一Pi和P一gP共阳性的AL患者预后极差，二者是影响AL预后的重要指标。 3 .GST一Pi在AL中的表达与活性呈高度正相关。