琼胶酶产生菌的筛选、鉴定及培养条件研究

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琼胶是一种从海洋红藻中提取出来的水溶性多糖,其主要成分为琼胶糖和硫琼胶,不仅应用于临床、生化、食品、医药等领域;而且作为实验室培养基载体也被广泛应用,鉴于其不易被绝大多数微生物所降解的特性。琼胶酶能够水解琼胶多糖,在海藻单细胞分离、酶解破壁制备原生质体中具有重要的价值,是海藻遗传工程的一种工具酶;并且,它在分子生物学方面也应用广泛。研究产生琼胶酶的海洋细菌有着应用价值和理论意义。本实验从大连沿海的石花菜中经过初筛和复筛,分离出相对酶活较高的产琼胶酶菌株,并通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA基因序列分析研究其分类地位。该菌株(暂命名为ZGR-26)为革兰氏阴性杆菌,与食琼胶弧菌(Vibrio agarivorans)序列同源性达到99%,两者生理生化特性基本相符,可初步确定为食琼胶弧菌(Vibrio agarivorans) 。本实验通过单因素和正交法试验获得产琼胶酶海洋细菌Vibrio agarivorans最佳发酵条件为:蛋白胨浓度4.0g/L,琼胶浓度1.5 g/L,pH7.0,接种量为12%,装瓶量为40mL/100mL,25℃,摇床转速为150 r/min,发酵48 h酶活力达到最高。在最优培养基组成与最佳条件下进行发酵培养,最高产酶活性达为108.2 U/mL,比未优化前提高了3倍。
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