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第一部分中国汉族男性非梗阻性无精子症ETV5,HORMAD1和HORMAD2基因相关性研究 目的:探讨ETV5,HORMAD1和HORMAD2基因多态性与非梗阻性无精子症的易感性。 方法:应用Sequenom MassArray质谱阵列技术对368例已生育的汉族男性人群(对照组)和361例汉族男性非梗阻性无精子症(实验组)ETV5基因的5个标签单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)位点（rs12631658,rs6444106,rs7430047,rs7433760,rs9824882),HORMAD1基因3个SNP位点(rs1336900,rs16840074,rs6694531),HORMAD2基因8个SNP位点（rs8135823,rs11090601,rs4823073,rs5763779,rs718772,rs9620953,rs9625930,rs975704)进行基因型检测。应用Plink1.07软件对数据资料进行统计分析,比较对照组与病例组最小等位基因频率(MAF)及基因型差异,运用Haploview软件对ETV5、HORMAD1和HORMAD2基因进行单体型分析。 结果:ETV5基因5个标签SNP,HORMAD13个SNP和HORMAD28个标签SNP的等位基因频率、基因型分布在实验组和对照组均无统计学差异(P>0.05),进一步的单体型分析亦未显示统计学差异(P>0.05)。当分析各SNP位点基因型在NOA亚组分布情况,我们发现HORMAD2基因 rs718772位点最小等位基因频率(MAF)分布在双侧平均睾丸体积大于10ml组与小于10ml组中有显著性差异(P=0.035)。 结论:检测的ETV5基因,HORMAD1和HORMAD2基因SNP位点多态性与汉族男性非梗阻性无精子症的发生可能不相关,HORMAD2基因 rs718772位点SNP可能与NOA患者的睾丸发育有关。 第二部分 CREM信号通路基因单核甘酸多态性与NOA发生的关联性研究 目的：比较CREM信号通路相关基因CREM、ACT、Kif17b和SPAG8基因17个SNPs(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点的基因型频率、等位基因频率和单体型频率等在特发性非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia,NOA)患者及正常生育男性间的分布,探讨这4种基因突变是否为 NOA的致病因素。同时运用q-RT-PCR方法,研究CREM在NOA(生精阻滞)患者睾丸组织及正常睾丸组织的表达差异,探讨CREM基因在精子发生过程的作用及意义。 方法：我们选择361例特发性非梗阻性无精子症(NOA)作为实验组,368例精液质量正常的男性作为对照组。采用Sequenome Massarray质谱阵列技术对CREM、ACT、Kif17b和SPAG8基因的17个SNPs位点进行了基因型分型。选取30例生精阻滞患者及30例正常精子发生的睾丸组织,运用q-RT-PCR的方法检测CREM基因的在两组的mRNA表达水平,T检验进行数据统计,P<0.05为具有统计学意义。 结果：CREM基因共检测4个 SNP位点(rs4934540,rs2295415,rs11592356,rs1148247),其中rs4934540位点C等位基因频率(24.7％VS34.4%,P=4.9*10-5,OR=0.624,95%CI=(0.497-0.784),rs2295415位点的G等位基因频率(18.0% VS24.2%,P=0.003,OR=0.686,95%CI=(0.532-0.885),rs11592356位点G等位基因频率(6.9%VS10%,P=0.036,OR=0.672,95%CI=(0.461-0.978)均在NOA组显著低于正常生育组,提示该位点的变异可能对正常精子的发生具有保护作用,进一步的单体型分析提示TATG(rs493454,rs2295415,rs11592356 and rs1148247)单体型的比例在NOA组显著高于正常生育组(P=0.011,OR=1.317,95%CI=1.064-1.631)。而ACT基因9个标签SNPs(rs2273621,rs9373985,rs2252816,rs9398152,rs9398148,rs4839688,rs17056756,rs3798292,rs9486705)、KIF17b3个SNP(rs631357,rs522496,rs2296225)、SPAG8基因1个SNP(rs3763631)基因型分布在实验组及对照组均未见差异。CREM基因在NOA(生精阻滞)组及正常精子发生中睾丸组织的表达用明显差异,CREM基因在NOA(生精阻滞)患者睾丸组织中低表达(P=0.00001)。 结论：CREM基因多态性可能是中国精子发生障碍患者的遗传易感因素,rs4934540,rs2295415,rs11592356三个位点对精子发生可能起保护作用,而ACT、KIF17b和SPAG8基因单核苷酸多态性与NOA的发生无关。CREM的正常表达对精子的正常发生具有重要的作用,CREM的低表达可能是精子发生障碍的一个重要原因。