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目的：2型糖尿病(type2diabetes mellitus，T2DM)常见的慢性并发症是大血管病变，以病变重，死亡率高为特点，动脉粥样硬化（arteriosclerosis，AS）是其典型的病理改变。近年研究表明，NADPH氧化酶来源的ROS与AS的发生发展密切相关，其基因已成为研究AS的候选基因。分子生物学研究发现NADPH氧化酶亚单位p22phox的编码基因CYBA的第242位上C→T突变影响自由基的产生，被证实是有意义突变。8-异前列腺素F2α(8-isoprostagland in F2α,8-iso-PGF2α)属于异构前列腺素家族成员,它其在人体中的含量稳定并且灵敏性高，是测量体内氧化应激强度的最佳指标。因此本次研究的目的是①通过检测T2DM患者血清中氧化应激产物8-iso-PGF2α的水平，以明确NADPH氧化酶在T2DM大血管病变发生中所起的作用。②确定T2DM患者的基因型，以进一步了解NADPH氧化酶p22phox C242T基因多态性与DM大血管病变的关系，从而为DM大血管病变的病理机制提供分子学依据。方法：按1999年WHO提出的T2DM诊断和分型标准，随机选择无血缘关系的T2DM患者共215例，按有无大血管病变分为单纯T2DM组110例，其中男61例，女49例，年龄54.4±9.0岁，病程6.9±1.3年；T2DM大血管病变组105例，其中男60例，女45例，年龄55.9±10.4岁，病程7.00±1.2年。正常对照组：为同期我院医务人员及常规体检人群中健康个体100例，其中男63例，女37例，年龄52.8±11.4岁，无心、脑、肝、肾脏病史。实验者禁食12h，然后空腹抽取静脉血3ml，先用乙二胺乙酸抗凝，用于抽取基因组DNA；再抽取4ml静脉血，分离血清，用于生化指标和8-iso-PGF2α的检测，二者均保存在-20℃以下.1）临床指标的测定：①测定身高、体重、腰围和臀围，计算体质量指数=体重/身高2和腰/臀=腰围/臀围；②应用全自动生化分析仪测定血糖、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇；③用免疫比浊法和放射免疫法分别测定糖化血红蛋白、空腹胰岛素，计算胰岛素敏感指数=1/（空腹胰岛素×空腹血糖）。2）酶联免疫吸附法测定8-iso-PGF2α的水平。3）C242T多态性的检测：①基因组DNA提取：用血液基因组DNA小量提取试剂盒提取3ml乙二胺乙酸抗凝血中外周血白细胞DNA，然后把DNA溶液放在分光光度仪上测定其浓度和纯度。②聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测p22phox基因C242T位点多态性：进行PCR扩增得模板为外周血白细胞基因组DNA，上、下游引物序列分别是：5’-GTGAGTCTCCTCCTGCTCTGGGGT-3’、5’-GCTTGTTTCGGTCCTGGGTGTTCT-3’,25ul反应体系中含基因组DNA2ul,上下游引物各1ul,PCRPremix12.5ul,灭菌蒸馏水8.5ml。开始在扩增仪上反应：94℃预变性5min,94℃变性30s,54℃退火30s,72℃延伸1min,完成35个循环,最后在72℃延伸7min。然后应用限制性内切酶RsaI进行酶切,最后把酶切产物放在琼脂糖凝胶上电泳,观察条带的类型，判断NADPH氧化酶p22phox亚基基因型。CC基因型可见348bp片段,TT基因型可见160bp和188bp两个片段,CT基因型可见348bp、160bp、188bp三个片段。4）统计学处理：应用SPSS16.0软件处理所有数据。计量资料进行正态性检验，统计描述用均数±标准差（s）或者中位数（四分位数间距）M(Q)表示；各组基因频率的群体代表性用Hardy-Weinberg平衡法检验；计量资料的组间比较用方差分析或秩和检验；计数比较的组间比较用X2检验；进行8-iso-PGF2α浓度与其他因素的相关性分析采用Spearman相关分析；用Logistic回归分析2型DM大血管病变发生的危险因素。结果：①DM组与正常对照组的年龄、性别构成比无显著性差别，具有可比性；糖尿病两组的BMI、WHR、SBP、DBP、TG、TC、LDL-C、FBG及HbA1c显著高于对照组（P＜0.05），HDL-C低于对照组（P＜0.05）；T2DM大血管病变组的BMI、WHR、SBP、DBP、LDL-C显著高于单纯T2DM（P＜0.05），HDL-C、ISI低于单纯T2DM组（P＜0.05）。②单纯T2DM组8-iso-PGF2α水平（33.29±12.65pg/ml）较正常对照组（27.95±12.69pg/ml）明显升高（P＜0.01），并且大血管病变组（48.89±24.34pg/ml）明显高于正常对照组和单纯T2DM组（P＜0.01）。③8-iso-PGF2α与BMI、WHR、TG、TC、LDL-C、FBG、HbA1c及血压呈显著正相关，与HDL-C、ISI呈显著负相关，与年龄、性别无显著相关性。④正常对照组、单纯DM组、DM大血管病变组T等位基因频率分别为4.50%、7.73%、15.71%，CT+TT基因型频率分别为9%、15.45%、26.67%。比较各组间T等位基因和CT+TT基因型的频率，正常对照组与单纯T2DM组无显著性差异；在DM大血管病变组该频率显著高于正常对照组和单纯DM组。⑤无论在正常对照组和T2DM组中，8-iso-PGF2α水平都与NADPH氧化酶C242T基因多态性有关：TT+CT型8-iso-PGF2α水平为63.67±20.39pg/ml，高于CC型（31.23±13.93pg/ml），二者比较差异具有统计学意义；与CC型相比，CT+TT型的BMI、TC、TG、HbA1c、FBG及血压升高， ISI下降。CT+TT型组大血管病变发生率为52%，高于CC型组的29%。（X2=10.06，P<0.01）。⑥多元回归分析显示BMI、LDL、ISI及8-iso-PGF2α是大血管病变的独立危险因素。结论：①T2DM患者血清8-iso-PGF2α水平升高，并且是T2DM大血管病变的危险因素，表明氧化应激在T2DM大血管病变中起重要作用。②血清8-iso-PGF2α水平与NADPH氧化酶C242T基因多态性密切相关，T等位基因携带者血清血清8-iso-PGF2α水平较高。③p22phox亚基C242T基因多态性可能不是T2DM大血管病变独立危险因素。