论文部分内容阅读
目的:应用替诺福韦酯溶液作用于体外培养的SH-SY5Y细胞、神经元和鼠脑片神经元,观察不同浓度替诺福韦酯溶液对细胞存活率、凋亡及相关指标的影响。研究以不同类型的细胞为模型,初步探讨替诺福韦酯对神经的损伤和作用机制及替诺福韦酯长期应用与艾滋病脑病的关系。方法:通过MTT比色法检测替诺福韦酯对细胞存活率的影响;酶标法检测替诺福韦酯对细胞培养液中LDH活性的影响;利用Hoechst-33342染色观察替诺福韦酯对细胞形态上的变化特征;应用原位末端转移酶标记法(TUNEL)和Annexin V/PI标记染色流式细胞仪检测替诺福韦损伤细胞的凋亡情况;细胞丙二醛(MDA)测试试剂盒测定细胞内丙二醛(MDA)的量;DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平;TUNEL法检测替诺福韦酯对脑片神经细胞凋亡的影响;Caspase-3试剂盒检测替诺福韦酯对细胞内Caspase-3的活化程度的影响。结果:MTT法和LDH法结果发现替诺福韦酯抑制SH-SY5Y细胞和神经元细胞的生长,随着替诺福韦酯浓度的增加对细胞的抑制作用越明显(P<0.05),说明替诺福韦酯氧化损伤细胞。替诺福韦酯导致SH-SY5Y细胞和神经元细胞的形态发生改变,具体变现为染色质凝聚,细胞核浓缩和边缘化,出现凋亡小体等细胞凋亡的表现特征;TUNEL法和Annexin V/PI标记染色检测显示替诺福韦酯(10umol/L、20umol/L、40umol/L)处理72h细胞后,细胞的凋亡率与对照组相比明显升高(P<0.01);细胞的氧化和抗氧化之间的相关物质或酶发生变化,细胞内ROS和MDA的量增加,Caspase-3活化也明显升高(P<0.01)。小鼠脑片神经细胞经10umol/L、20umol/L、40umol/L替诺福韦酯处理72h后出现大量神经细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.01)。结论:(1)替诺福韦酯作用于SH-SY5Y细胞和神经元细胞降低细胞的存活率,且使LDH水平升高,说明替诺福韦酯对神经具有明显毒性。(2)替诺福韦酯对神经的损伤体现在诱导细胞凋亡且呈浓度依赖性。(3)替诺福韦酯诱导神经细胞凋亡的机制主要是生成大量的ROS、进而使MDA和Caspase-3活化升高且呈浓度依赖性。