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附子为回阳救逆的第一要药,是临床常用的有毒中药。2015年版《中华人民共和国药典》附子项下收载了黑顺片、白附片、淡附片、炮附片4种附子饮片规格,其中,以黑顺片、白附片应用最多,其质量优劣直接影响到临床用药的安全与有效。目前中药标准物质主要包括中药化学对照品、对照药材与对照提取物,其在中药饮片的质量控制中发挥了良好的作用。然而,饮片来源于药材而异于药材,经炮制后其外观性状和内在质量均发生一定改变,从而导致药性和功效的变化,故采用目前的质量控制方法仍然无法反映中药饮片特有的内涵属性。现版药典对于黑顺片、白附片的质量控制在性状、鉴别、检查等方面仅仅描述为:同药材,且无显微鉴别、浸出物、灰分、酸不溶性灰分等项。可见黑顺片、白附片相关标准物质以及质量评价体系仍有待完善。本研究对黑顺片、白附片进行了系统研究,为黑顺片、白附片标准饮片的制备及质量评价体系的完善提供了参考。利用测色计将黑顺片、白附片颜色进行客观量化,运用多元数理统计分析方法将相关数据进行分析,对色度值在黑顺片、白附片质量评价中的应用价值进行了探索。通过将生、制附子饮片颜色、质地、显微、TLC、HPLC特征图谱,3种单、双酯型生物碱含量进行对比,初步阐明了附子炮制前后特征属性的变化。一、黑顺片及白附片候选标准饮片的基础研究对道地产区附子的采集、初加工、炮制加工进行调研,确定了附子的采集,黑顺片、白附片的炮制加工工艺流程及相关技术参数,对候选标准饮片的均匀化工艺进行研究,将通过药典三号筛作为均匀化饮片的粒径控制指标,为候选标准饮片制备技术规范的制定提供依据。二、黑顺片、白附片的质量识别特征及适用性研究选用通过国家GAP、GMP认证的四川江油中坝附子科技发展有限公司生产的3批合格黑顺片、白附片作为候选标准饮片,通过对其外观性状、薄层鉴别、显微鉴别、水分检查、总灰分检查、酸不溶性灰分检查、3种双酯型生物碱限量检查、水溶性浸出物、3种单酯型生物碱含量测定、HPLC特征图谱等方面进行系统质量考察,初步归纳出黑顺片、白附片的质量识别特征。再收集市售黑顺片、白附片进行质量识别特征的适用性研究,最终制定黑顺片、白附片质量评价草案,为黑顺片、白附片质量评价体系的完善提供依据。三、附子炮制前后特征属性的比较研究将附子生、制饮片颜色与质地客观量化,运用数理统计的方法比较其差异。色彩色差的聚类分析结果表明,当λ=2.5时,样品聚为两类,带皮饮片（黑顺片、生附片）、去皮饮片（白附片）各聚为一类。当λ=1.8时,样品聚为三类,黑顺片、白附片、生附片各聚为一类,表明三者粉末颜色有差别,根据λ的不同,可将样品不同程度的聚类。质地的两样本独立t检验结果表明,黑顺片、白附片硬度差异无统计学意义,表明两者硬度基本一致;而生、制（黑顺片、白附片）饮片硬度差异有统计学意义,表明附子生品经炮制后硬度增加且有显著性差异。显微鉴别结果表明,生品散在淀粉粒和淀粉粒团块较多,制品（黑顺片、白附片）多为糊化的淀粉粒团块,散在的淀粉粒较少;生、制品中的导管和后生皮层细胞均无显著差别;白附片为附子除去外皮的饮片,基本观察不到后生皮层细胞。薄层鉴别结果表明,生品较制品薄层斑点大、多、色深;黑顺片与白附片薄层色谱行为基本一致。HPLC特征图谱及含量测定结果表明,制品中主要毒性成分3种双酯型生物碱含量较生品大为降低;黑顺片中3种单酯型生物碱总量降低至生品的40.1%;白附片降低至生品的38.4%。附子炮制前后其外观性状、显微、薄层、HPLC特征图谱及含量方面变化明显,为其特征属性变化的阐明以及更科学、准确的评价黑顺片、白附片质量提供了依据。黑顺片和白附片的薄层色谱、特征图谱及含量测定结果基本一致,表明药典将其均作为附片应用具有科学性。四、基于色彩色差的市售黑顺片与白附片多元统计分析研究利用CM-5分光测色计将黑顺片、白附片色彩色差进行客观量化,运用数理统计方法对其数据进行分析,探究色度值在黑顺片、白附片质量评价中的应用价值。聚类分析结果表明,当欧氏距离λ=7时,样品聚为两类,染色的黑顺片、未染色的黑顺片与白附片各聚为一类。当λ=5时,样品聚为三类,染色的黑顺片、白附片B1～B6、白附片B7～B10与未被染色的黑顺片各聚为一类,说明部分白附片与未染色的黑顺片颜色较为接近,同时也为黑顺片和白附片在临床作为同一规格附片使用提供了依据。主成分分析结果表明,黑顺片、白附片中代表亮度的L值对总色度值E的影响较大。未染色黑顺片粉末的总色度值E在76.91±3.12范围内;白附片粉末的总色度值E在85.76±3.61范围内,总体而言,黑顺片较白附片色深,平均E值较小。相关性检验结果表明,白附片中水分与E存在直线相关关系,根据E值可快速推测饮片水分值。表明了色度值在黑顺片、白附片的质量评价中具有一定应用价值。五、黑顺片、白附片与淡附片TLC特征图谱的鉴别研究黑顺片、白附片为附子未加辅料炮制的饮片,而淡附片为附子饮片中唯一使用甘草、黑豆辅料炮制的饮片。2015年版《中国药典》关于生物碱类的薄层鉴别并不能体现辅料炮制淡附片的特点。研究建立了体现辅料特征的淡附片TLC特征图谱方法,并进行了方法学考察。利用此方法对附子生、制饮片及加辅料炮制的淡附片与未加辅料炮制的黑顺片、白附片进行了对比研究,结果表明该方法重复性、耐用性良好,在25℃,湿度在20%左右时结果较好。1、2、3号斑点为淡附片区别于黑顺片、白附片的特征性斑点。为黑顺片、白附片与淡附片的鉴别研究提供了依据。综上所述,本研究初步确定了黑顺片、白附片质量评价草案,运用多元数理统计的方法探究了色度值在黑顺片、白附片质量评价中的应用价值,从外观性状、显微、薄层、含量及HPLC特征图谱等方面研究了生、制附子饮片炮制前后的特征属性变化,建立了体现辅料特征的附子饮片TLC鉴别方法,为黑顺片、白附片标准饮片的制备及质量评价体系的完善奠定了基础,为中国药典将黑顺片、白附片同作为附片用于临床提供了科学依据。