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目的：1.探讨慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B, CHB)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中CD4+CD25+调节性T细胞(T regulatory cells,Tregs)中T细胞受体(T cell receptor, TCR) β链各家族互补决定区3(complementarity determining region3, CDR3)谱系特征。了解TCR BV家族CDR3谱系克隆增生异常率(单/寡/偏峰谱型)；2.对其实验结果呈显著特征的CD4+CD25+Treg TCR CDR3谱系家族(单峰谱型)进行CDR3区基因测序,分析其氨基酸组成,了解CHB患者外周血优势增生的CD4+CD25+Tregs细胞是否具有相同的基序,试图寻找到相同的CD4+CD25+Treg细胞克隆,从而为CHB患者的个体化免疫治疗提供理论依据。方法：1.采集2例正常人及8例CHB患者外周抗凝静脉血各10ml,病例样本为遵义医学院感染科住院患者,采用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,磁珠分选法分选CD4+CD25+Tregs,流式鉴定其纯度,提取总RNA,逆转录合成cDNA,根据TCR β链24个可变区基因(TCR BV)家族设计相应的上游引物,并在p链恒定区基因区(BC)设计一条共用的FAM荧光标记下游引物及对照引物。PCR(polymerase chain reaction, PCR)扩增出24个TCR BV家族包含完整CDR3区的PCR产物,电泳鉴定目的片段,送上海基康行毛细管电泳法；2.分析CHB患者CD4+CD25+Tregs TCR BV家族CDR3谱系特征,选出呈单峰谱型的TCR BV家族PCR产物进行基因测序,DNA tools6.0等分子生物信息学软件分析CDR3区的基因和氨基酸组成；3.采用Spearman’s分析CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs TRBV家族CDR3克隆增生异常率与HBV-DNA载量、丙氨酸转移酶(Alanine aminotransferase, ALT)、总胆红素(Total bilirubin, TB)及凝血酶原活动度(Prothrombin Activityprothrombin Time Activity,PTA)的相关性。结果：1.2例正常人外周血CD4+CD25+Tregs TCR β链24个家族CDR3谱系图大部分家族呈多峰谱型的高斯分布,其24个家族PCR产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳时可发现一条模糊条带。各家族的CDR3表达频率相近,表现出不同的CDR3多态性。2.8例CHB患者外周血Tregs TCR β链24个家族CDR3谱系图均呈现一个或者多个形态不一、数量不等的单峰、寡峰、偏峰,其中一些家族表达极低或缺失。琼脂糖凝胶电泳图上多数家族预测范围大小处呈现一条模糊条带,部分家族出现清晰条带或无条带。结论：1.正常人外周血CD4+CD25+Tregs TCR BV家族谱型呈多克隆性增生；CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs多个TCR BV家族谱型存在单克隆或者寡性增生：2.CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs TCR出现优势利用的家族如：BV1、BV3、BV8、 BV13.2、BV15、BV20,这些优势利用的家族可能在CHB患者的免疫应答中发挥了重要的作用。3.CHB患者外周血CD4+CD25+Tregs TRBV家族CDR3克隆增生异常率与HBV-DNA载量呈正相关关系。