PDRG1在乳腺癌中的表达及其沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:taozijian
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本文主要从以下几部分展开论述:  第一部分 PDRG1基因在乳腺癌组织中的表达及意义  目的:检测PDRG1基因在乳腺癌、乳腺癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织中的表达情况,初步探讨其与乳腺癌发生、发展的关系。方法:用免疫组织化学法检测50例乳腺癌、50例乳腺癌旁组织和30例乳腺纤维腺瘤组织中PDRG1的蛋白表达,并分析PDRG1蛋白表达与临床病理特征、病理指标之间的关系。结果:PDRG1在乳腺癌旁组织、乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组织中的阳性率分别是10.0%、13.3%和70.0%,PDRG1基因在乳腺癌中的蛋白表达明显高于乳腺纤维腺瘤和乳腺癌旁组织中的表达(P<0.01),而在乳腺纤维腺瘤组织与乳腺癌旁组织中表达相比差异没有统计学意义(P>0.05)。PDRG1蛋白表达与患者年龄、TNM分期、T分期、病理分级、淋巴结转移、组织类型这些临床病理特征未见相关性(P>0.05)。PDRG1蛋白表达与ER、PR、P53和Ki67表达也未见相关性(P>0.05),而与C-erbB-2蛋白表达呈正相关(P<0.01)。结论:PDRG1在人乳腺癌组织中呈高表达,和C-erbB-2蛋白表达呈正相关,PDRG1可能与乳腺癌的发生相关。  第二部分 siRNA靶向沉默PDRG1基因对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响  目的:验证siRNA干扰PDRG1基因的沉默效应,研究靶向沉默PDRG1基因对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:针对人PDRG1基因mRNA序列设计并化学方法合成3对PDRG1-siRNA;通过脂质体转染试剂进行siRNA转染,优化转染条件;设定siRNA干扰组(PDRG1-siRNA)、空白对照组(仅加细胞培养液)、转染试剂对照组(不加siRNA)和siRNA阴性对照组(NC-siRNA),利用Real-time PCR和Western Blot分别检测PDRG1-siRNA转染前后MCF-7细胞中PDRG1基因和蛋白表达水平,筛选出一条干扰最有效的PDRG1-siRNA序列;通过该序列干扰PDRG1基因,分别用CCK-8和流式细胞仪检测干扰前后MCF-7细胞增殖和凋亡的变化。结果:当siRNA与脂质体转染试剂(体积比)比例为1比1.5时其转染效率最高(83%),Real-time PCR、Western Blot结果显示,PDRG1-siRNA3干扰效果最好,能有效降低PDRG1mRNA和蛋白水平。PDRG1-siRNA3干扰组与空白对照组、阴性对照组比较,MCF-7细胞增殖明显减慢(P<0.05),细胞凋亡率无明显差异(P>0.05)。结论:筛选出一对能明显干扰PDRG1基因的序列,在体外可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,但对细胞凋亡无明显作用。
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