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背景透明质酸(hyaluronic acid, HA)与A型肉毒毒素(botulinum toxin type A, BTX-A)是目前应用最为广泛的除皱美容产品,关于二者单独治疗的安全性研究也已非常充分。而现在透明质酸与肉毒毒素联合注射治疗越来越多地应用于临床,但目前国内外均无该联合治疗安全性深入研究的详尽报道。此外,体外研究表明,肉毒毒素可抑制成纤维细胞的增长从而减少胶原蛋白的沉积,但目前尚无体内研究表明肉毒毒素注射是否会引起真皮层胶原沉积的减少。目的(1)评估BTX-A和HA联合皮下注射的安全性；(2) BTX-A、HA以及二者联合应用对真皮层成纤维细胞增长和胶原沉积的影响。方法选择雄性新西兰兔作为动物模型,建立对照组(注射生理盐水组)、HA组、BTX-A组和二者联合注射组,取处理后第1周、第2周和第4周三个时间点,通过(1)大体观察不同处理组局部皮肤反应的差异；(2)病理切片HE染色观察不同处理组所引起皮肤异物反应和炎症反应的差异；(3)病理切片HE染色观察不同处理组对真皮层成纤维细胞数量、形态影响的差异；(4)Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色观察不同处理组对真皮层胶原含量影响的差异。结果(1)局部反应：第1、2和4周,各处理组局部反应阳性率无显著性差异。各处理组局部反应阳性率随时间变化无显著性差异；(2)异物反应：第1、2周,联合组异物反应分级评分与HA组相似,均显著高于对照组,第4周,各处理组异物反应分级评分无显著性差异。各处理组第2、4周异物反应评分均显著低于第1周；(3)炎症反应：第1、2周,联合组炎症反应分级评分与HA组相似,均显著高于对照组,第4周,各处理组炎症反应分级评分无显著性差异。各处理组第2、4周炎症反应评分均显著低于第1周；(4)成纤维细胞数目：第1、2周BTX-A组成纤维细胞数目显著低于对照组,第4周BTX-A组与对照组无显著性差异,而第1、2和4周,HA组和联合组成纤维细胞数目均显著高于对照组。各处理组成纤维细胞数目随时间显著性减少；(5)Ⅰ、Ⅲ型胶原含量：第2、4周,BTX-A组免疫组化切片Ⅰ、Ⅲ型胶原的平均IOD值均显著低于对照组。第1、2和4周,HA组免疫组化切片Ⅰ、Ⅲ型胶原的平均IOD值均显著高于对照组,而联合组与对照组相近。各处理组第2、4周Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原平均IOD值均显著高于第1周。结论(1) BTX-A与HA联合皮下注射所引起局部异物反应和炎症反应与HA单独皮下注射相近,因此具有良好的安全性；(2)与皮下注射生理盐水相比,BTX-A单独注射将相对减少成纤维细胞数目,而HA单独注射和BTX-A、HA联合注射将相对增加成纤维细胞数目,因此联合注射可有效避免BTX-A单独注射引起的成纤维细胞数目减少；(3)与皮下注射生理盐水相比,BTX-A单独注射将相对降低Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的沉积,HA单独注射将相对增加Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的沉积,而BTX-A、HA联合注射可有效缓解BTX-A单独注射引起的胶原沉积抑制作用。