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1.目的:用高脂饮食诱导的OSMR-β、ApoE全身基因双敲除(OSMR-β-/-ApoE-t-)、ApoE全身基因敲除(ApoE-/-)小鼠和小鼠体内分离、体外氧化修饰低密度脂蛋白刺激的腹腔巨噬细胞作为实验对象,探讨OSMR-β缺乏在高脂饮食诱导的小鼠动脉粥样硬化模型和氧化修饰低密度脂蛋白刺激下体外巨噬细胞泡形成沫细胞的可能机制。2.方法:(1)动物分组:将实验动物分为4组,分别为ApoE-/-正常饮食组(ApoE-/-NC)、ApoE-/-高脂饮食组(ApoE-/-HFD)、OSMR-β-/-ApoE-/-正常饮食组(OSMR-β-/-AβoE-/-NC)、OSMR-β-/-ApoE-/-高脂饮食组(OSMR-β-/-AβoE-/-HFD)。(2)建立动脉粥样硬化模型及取材:高脂饮食喂养28周后用巴比妥钠麻醉,打开胸腔游离出整个主动脉树(从主动脉弓起始处到髂动脉左右分支处),剥除血管外膜脂肪、拍照、固定。剪下行主动脉树拍照后的心脏,切下心尖下1/3,保留上1/3主动脉窦。(3)小鼠心脏、血管的病理取材样本用于石蜡包埋切片,采用油红O染色评价全长主动脉的粥样斑块表面积,H&E染色评价动脉粥样硬化斑块横截面积及坏死中心核的面积,PSR染色评价斑块横截面积大小及斑块内胶原含量,荧光染色用于确定斑块内OSMR-β的表达及细胞定位或其它种类细胞或因子的含量。(4)小鼠动物实验中的分生样本用于检测OSMR-β表达水平、炎症因子转录及表达水平、信号通路相关因子的水平。(5)腹腔原代巨噬细胞培养:从OSMR-β-/-AβoE-/-和AβoE-/-小鼠腹腔洗脱出巨噬细胞,以血清饥饿法处理24小时后在体外给予ox-LDL孵育24小时,固定,随后用油红O染色探测巨噬细胞脂质积聚情况。(6)骨髓移植:雄性ApoE-/-小鼠首先经总剂量为11 Gy的放射性照射,随后将分别从OSMR-β-/-ApoE-/-和ApoE-/-小鼠体内提取的骨髓注射入受体小鼠体内,经16周的HFD后进行相关的病理染色及分子生物学和体外刺激实验。(7)人体标本:从经心脏移植术中取出的冠心病患者心脏分离出右冠状动脉进行相关的分子生物学实验,检测OSMR-β在血管内的表达量及细胞定位。3.结果:(1)OSMR-β与Mac3荧光双染显示OSMR-β在动脉粥样硬化斑块中主要定位于巨噬细胞中,Western blot分析及荧光双染半定量均显示在冠心病人以及小鼠的斑块内及体外培养的原代巨噬细胞中其含量均升高。(2)油红O染色以及H&E染色表明敲除OSMR-β的OSMR-β-/-(ApoE-/-背景)减轻高脂饮食诱导的动脉粥样硬化形成,主动脉窦及头臂干动脉的斑块面积均缩小。(3)敲除OSMR-β帮助维持动脉粥样硬化斑块的稳定性,体现在OSMR-β-/-ApoE-/-组斑块内坏死核面积缩小(主动脉窦及头臂干动脉H&E、PSR染色)、胶原含量增加(PSR染色)、平滑肌细胞含量增多(SMA免疫荧光染色)、脂质沉积(油红O染色)和巨噬细胞浸润减少(CD68荧光染色)。(4)敲除OSMR-β起到的抗动脉粥样硬化作用主要依赖其抗炎效应,实时PCR显示促炎症因子的转录水平降低,ELISA检测到血浆中促炎症因子的含量降低。(5)敲除OSMR-β通过阻断JAK/STAT3信号通路抑制及蛋白质表达水平,Western blot法显示JAK2、STAT3的磷酸化水平下调,荧光双染结果显示巨噬细胞内p-STAT3含量降低。(6)腹腔原代巨噬细胞体外培养试验和骨髓移植试验与上述实验结果一致并进一步巩固了上述结论,由骨髓移植诱导的获得性巨噬细胞OSMR-β缺乏可改善动脉粥样硬化,抑制泡沫细胞形成——可能与促进巨噬细胞的LDL转运平衡偏向于向胞外运输有关。