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目的在体外建立OGD/R细胞模型,探究SH-SY5Y细胞中Nrf2与线粒体分裂存在的调控关系,以及这种关系是否经由调控Drp1实现。方法正常培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),通过三气培养箱和无糖培养基模拟OGD/R的条件,参考文献选取氧糖剥夺时间长度分别为4 h、6 h、8 h和10 h同时选取恢复时间长度为0 h、6 h、12 h、18 h、24 h,组合得出OGD/R的预实验时间组合,细胞经过不同OGD/R处理后,通过CCK8检测细胞的存活率,以细胞凋亡明显但仍有半数存活时间组合作为建立细胞OGD/R模型的时间条件;根据分组不同用Nrf2激动剂tBHQ、抑制剂Brusatol和赋形剂对实验细胞进行4h预处理后进行OGD/R操作,分组如下:(1)OGD/R组:将8000SH-SY5Y细胞接种于96孔板中,稳定一天后,换不含糖的EBSS培养基并放入三气培养箱中培养4小时,换成普通培养基并转移至正常含氧的培养箱中培养18小时(OGD4h/R18h);(2)OGD/R+tBHQ组:SH-SY5Y细胞换含有tBHQ的正常培养基(终浓度25μM)预处理4h,然后进行OGD/R操作;(3)OGD/R+Bru组:正常培养,换混有Bru的培养基(终浓度100nM)处理4h,然后进行OGD/R操作;(4)OGD/R+Veh组:细胞换含有DMSO的正常培养基(含量0.1%)预处理4h,然后进行OGD/R操作;采用Western blot检测Nrf2、Drp1的表达量;制备细胞沉淀的切片,通过电镜观察细胞内线粒体的形态。结果1.OGD4h相较其他时间细胞存活率最高,再经R18h左右时细胞存活率明显下降,是能更好的反应缺血再灌注损伤的时间组合模型。2.OGD/R+tBHQ组Nrf2蛋白的表达明显高于OGD/R组(P<0.05),说明tBHQ可使细胞中Nrf2的含量增加;OGD/R+Bru组Nrf2蛋白的表达则低于OGD/R组(P<0.05),说明Bru可使细胞中Nrf2的含量减少,tBHQ和Bru对Nrf2确有激动剂和抑制剂效果。3.OGD/R+tBHQ组Drp1蛋白的表达低于OGD/R组(P<0.05),说明tBHQ可使细胞中Drp1蛋白的含量减少;OGD/R+Bru组Drp1蛋白的表达高于OGD/R组(P<0.05),说明Bru可使细胞中Drp1的含量增加,细胞中的Nrf2和Drp1含量呈负性联动变化,提示可能存在调节关系。4.电镜观察结果显示OGD/R+t BHQ组线粒体分裂的程度和比例较OGD/R组有所减少,而在OGD/R+Bru组又有所增多(P<0.05),表明蛋白变化和线粒体分裂变化相一致。结论SH-SY5Y细胞中Nrf2含量的变化可以引起Drp1含量的负性相关变化,同时线粒体形态也产生相应动态变化。Nrf2对线粒体分裂有负向调控作用,可能是经由Drp1蛋白发挥作用的。