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[目的]探讨联合移植过表达Nurr1基因的小胶质细胞和神经干细胞对帕金森大鼠运动障碍的改善效果。[方法]1.取孕12.5dSD大鼠胚胎,分离中脑腹侧组织,剪碎并吹打形成单细胞悬液,神经干细胞原代培养基培养细胞形成神经球;取新生48h SD大鼠(Sprague-Dawley rats),分离大脑皮质,剪碎、胰酶消化,过滤形成单细胞悬液,原代小胶质细胞培养基混合培养并纯化。分别计算感染复数,将慢病毒稀释后,按照计算量加入细胞细胞培养基,通过慢病毒过表达系统分别过表达Nurrl((nuclear receptor subfamily 4,group A,member 2,NR4A2))基因,构建过表达 Nurrl 的神经干细胞和小胶质细胞载体;2.8%水合氯醛麻醉成年雄性SD大鼠,立体定向仪固定,切开头皮,暴露颅骨,找准定位点并钻孔,微量注射仪向大鼠右侧纹状体体内注射6-hydroxydopamine(6-OHDA,15 ug/ul,3ug/ul),术后 1W,0.25%APO(apomorphine)诱导大鼠旋转行为,建立SD大鼠帕金森,模型,旋转次数>7r/min视为建模成功;3.取建模成功的PD(Parkinson’s Disease)大鼠模型90只,随机分为对照组(sham)、NSC组、NNSC组、NNSC+MG组、NNSC+NNMG组,每组18只,按实验分组,分别通过原手术针孔,将细胞(NSC:MG,2:1)移植入纹状体损毁位点,治疗帕金森大鼠并在移植后1W、3W、6W、9W时间点APO诱导大鼠旋转行为,检测大鼠运动改善情况;4.分别在移植3W、9W后10%水合氯醛麻醉PD大鼠,生理盐水灌注后开颅取出脑组织,分离保留纹状体。RT-PCR、Western blot检测移植后不同时间点各组TH、DAT、Pitx3转录和表达水平;5.移植3W、9W后8%水合氯醛麻醉PD大鼠,生理盐水心脏灌注后再用4%多聚甲醛灌注至大鼠身体僵硬,取大鼠脑组织切片,细胞免疫荧光检测移植后各组大鼠纹状体TH、DAT、Nurr1、Iba1阳性细胞率。[结果]1.原代培养神经干细胞悬浮、聚集生长,呈神经球,细胞免疫荧光鉴定,Nestin染色阳性,过表达Nurr1基因神经球GFP阳性。原代培养小胶质细胞,贴壁生长纯化后细胞免疫荧光鉴定,CD11b/c染色阳性,过表达Nurr1基因小胶质细胞RFP阳性;2.APO诱导6-OHDA损毁纹状体的大鼠,大鼠向健侧旋转,旋转速度>7次/分;3.细胞移植治疗后不同时间点,APO诱导大鼠旋转行为,细胞移植后大鼠旋转次数较移植前明显降低,细胞移植组PD大鼠旋转次数明显低于对照组(p<0.05);过表达Nurr1基因的联合细胞移植组旋转次数明显低于其他各组(p<0.05)。4.RT-PCR、Western blot检测结果表明,细胞移植组在不同时间点TH、DAT、Pitx3转录和表达水平明显高于对照组(p<0.05);过表达Nurr1基因的联合细胞移植组TH、DAT、Pitx3转录和表达水平明显高于其他各组(p<0.05)。5.细胞免疫荧光表明,细胞移植组在不同时间点TH、DAT、Nurr1阳性细胞率明显高于对照组(p<0.05),Iba1细胞阳性率明显低于对照组(p<0.05);过表达Nurr1基因的联合细胞移植组在不同时间点TH、DAT、Nurr1阳性细胞率明显高于其他各组(p<0.05),Iba1细胞阳性率明显低于其他各组(p<0.05)。[结论]1.过表达Nurr1基因的神经干细胞与小胶质细胞联合移植可有效改善PD大鼠运动障碍;2.过表达Nurr1神经干细胞和小胶质细胞联合移植治疗帕金森病有望成为帕金森病的潜在治疗策略。