微囊藻毒素对3种淡水鱼肝脏HSP70基因转录水平的影响

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随着社会工业化进程的加快,大量含氮、磷的污染物被排放入自然水体中,加速了水体的富营养化,引发全球性的环境污染问题。本文研究内容主要为微囊藻毒素(MC-LR)对淡水鱼类肝脏热休克蛋白(HSP70)基因诱导表达水平之影响。以三种淡水鱼:鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix),草鱼(Ctenopharyngodon idellus),及尼罗罗非鱼(Oreochromis nilotica),对MC-LR的耐受性依次排列为尼罗罗非鱼、鲢鱼、草鱼,比较其处于微囊藻毒素造成的氧化压力下,肝脏HSP70的诱导表达水平。实验通过简并引物PCR从鲢鱼、草鱼及尼罗罗非鱼的肝脏克隆HSP70基因cDNA核心序列,并应用5′RACE和3′RACE技术分别扩增出它们的5′末端和3′末端序列而获得其cDNA全序列。序列分析表明,它们的HSP70基因cDNA全序列分别为2356bp、2346 bp及2242 bp,其中鲢鱼及草鱼的开放阅读框(ORF)均为1950 bp、编码649个氨基酸,而尼罗罗非鱼的ORF则为1917 bp,编码638个氨基酸。通过对上述三种淡水鱼(6-13)g活体腹腔注射亚致死量MC-LR(50μg kg-1 bwt)8h后,发现微囊藻毒素对尼罗罗非鱼肝脏HSP70基因表达有显著的诱导作用(P<0.05),然而鲢鱼肝脏HSP70基因mRNA表达水平虽出现明显的升势,但未出现显著的诱导作用(P>0.05),草鱼的则保持不变,即微囊藻毒素可能对草鱼肝脏HSP70基因mRNA的表达未能起到诱导作用。肝脏HSP70基因在微囊藻毒素的诱导作用下,其表达水平与对MC-LR的耐受性有着明显的相关性,对MC-LR有较高抵抗能力的鱼类(尼罗罗非鱼)其诱导表达水平最为显著,其次为抵抗能力一般的鱼类(鲢鱼),而对毒素较感敏的鱼类(草鱼)则本身没有改变。因此我们认为在淡水鱼类中,肝脏HSP70基因mRNA之诱导表达水平可能与微囊藻毒素之耐受性有关。另外,本实验亦克隆出斜带石斑鱼(Epinephelus coioides),鳙鱼(Aristichthysmobilis),鲫鱼(Carasslius auratus),白云金丝(Tanichthys albonubes),中华鲟(Acipensersturio Linnaeus),多鳍鱼(Polypterus senegalus Cuvier),斑鳢(Channa maculata)等鱼类HSP70基因的部份cDNA序列。
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