【摘 要】
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背景与目的MicroRNA（miRNA）是一类广泛存在于生物中,长度在22个核苷酸左右的单链小分子RNA。近年来,研究发现miRNA在成骨分化和骨形成中起到了重要作用。有文献报道miR-92b-3p可以促进人脐带间充质干细胞的成骨分化,但miR-92b-3p在小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1中的作用和机制尚未见报道。BMP-2是骨形成蛋白家族中重要的亚型,可以通过调控TGF-β/BMP等信号通路起
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背景与目的MicroRNA（miRNA）是一类广泛存在于生物中,长度在22个核苷酸左右的单链小分子RNA。近年来,研究发现miRNA在成骨分化和骨形成中起到了重要作用。有文献报道miR-92b-3p可以促进人脐带间充质干细胞的成骨分化,但miR-92b-3p在小鼠成骨样细胞系MC3T3-E1中的作用和机制尚未见报道。BMP-2是骨形成蛋白家族中重要的亚型,可以通过调控TGF-β/BMP等信号通路起到促进成骨分化的作用。本研究的目的在于探讨miR-92b-3p在BMP-2诱导的MC3T3-E1细胞成骨分化中的作用及其可能的机制。方法1 miR-92b-3p对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用（1）MC3T3-E1分别在完全培养基和添加了BMP-2的培养基中培养,RT-qPCR检测诱导前后miR-92b-3p的表达、碱性磷酸酶（ALP）染色检测诱导前后ALP活性。（2）在MC3T3-E1细胞中转染miR-92b-3p mimic或inhibitor,RT-qPCR检测过表达、干扰效率和ALP的表达,ALP染色检测诱导前后ALP活性。2 miR-92b-3p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制研究（1）利用star Base数据库和DAVID数据库预测、分析miR-92b-3p的靶基因。（2）MC3T3-E1细胞转染miR-92b-3p mimic或inhibitor,RT-qPCR和western blot检测靶基因的表达,分析miR-92b-3p对靶基因的作用。结果1 miR-92b-3p对MC3T3-El细胞成骨分化的影响（1）使用400 ng/m L的BMP-2诱导的MC3T3-E1细胞与对照组相比,miR-92b-3p表达升高（P<0.05）,碱性磷酸酶（ALP）活性升高。（2）MC3T3-El细胞转染miR-92b-3p mimic后,miR-92b-3p、ALP表达水平升高（P<0.05）,ALP活性升高。转染miR-92b-3p inhibitor后,miR-92b-3p、ALP表达水平降低（P<0.05）,ALP活性降低。2 miR-92b-3p调控MC3T3-El细胞成骨分化的作用机制研究（1）通过star Base数据库预测并筛选出miR-92b-3p下游204个靶基因,KEGG分析显示靶基因与Fox O信号通路等10条代谢通路相关,GO分析显示靶基因功能与Smad蛋白家族有关。结合富集分析结果和文献报道,发现miR-92b-3p下游存在靶基因Smad7,其是重要的成骨负向调控因子。（2）MC3T3-El细胞转染miR-92b-3p mimic后,Smad7 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。转染miR-92b-3p inhibitor后,Smad7 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论miR-92b-3p促进了BMP-2诱导的MC3T3-E1细胞的成骨分化,同时miR-92b-3p可以抑制成骨负向调控因子Smad7的表达,miR-92b-3p促进MC3T3-E1细胞成骨分化的机制可能是其抑制了成骨负向调控因子Smad7的表达。
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