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本论文建立了膦酸酯类除草剂O,O-二甲基-1-（苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯（简称Peng3）和O,O-二甲基-1-（4-甲基苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯（简称Mo2）对映体的正相高效液相色谱拆分方法。并研究了外消旋体和各对映异构体对大型蚤的急性毒性,为评估膦酸酯类除草剂对水生生物的危害提供一定的科学依据。论文利用Chiralcel AD手性色谱柱建立了O,O-二甲基-1-（苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯外消旋体和O,O-二甲基-1-（4-甲基苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯对映异构体的正相高效液相色谱（HPLC）拆分方法,分别测定了在AD柱上流动相极性改性剂的类型、含量以及温度对拆分效果的影响,确定了理想的拆分条件。同时初步探讨分析了对映体异构体分离机理。实验结果表明,在正相AD色谱柱中,以正已烷:异丙醇=90:10（V/V）为流动相,在25℃时,流速为1.00mL/min,进样量为20.00μL,波长为220nm的色谱条件下,O,O-二甲基-1-（苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯和O,O-二甲基-1-（4-甲基苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯都能得到较满意的基线分离效果。根据OECD所推荐的大型蚤急性毒性试验方法,研究了O,O-二甲基-1-（苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯和O,O-二甲基-1-（4-甲基苯氧乙酰氧基）乙基膦酸酯及其对映异构体对大型蚤的48h-LC50。结果表明:Rac-Peng3、Peng3-pk1、Peng3-pk2的48h—LC50分别为0.2741mg/L、0.3685mg/L、0.2623mg/L。三种形式的48h—LC50毒性大小顺序为:Peng3-pk2＞Rac-Peng3＞Peng3-pk1。Rac-Mo2、Mo2-pk1、Mo2-pk2的48h—LC50分别为0.3111mg/L、0.2561mg/L、0.2944mg/L。三种形式的48h—LC50毒性大小顺序为:Mo2-pk1＞Mo2-pk2＞Rac-Mo2。结果显示:外消旋体和各对映体的毒性有差异,但差距并不大,可能是由于膦酸酯类除草剂本身的毒性并不太强。