东方巴贝斯虫(Babesia orientalis)是牛的巴贝斯虫病中比较特殊的一个血液原虫虫种,其仅感染水牛的红细胞,由镰形扇头蜱经卵传播。在我国长江以南多省份均有流行,患病动物常出现黄疸、高热、贫血和血红蛋白尿等症状,严重时甚至死亡,对我国的水牛养殖业造成巨大的经济损失。现阶段对于东方巴贝斯虫的基因组信息所知有限,入侵相关机制的研究也鲜有报道。基于此,本研究一方面克隆并注释了东方巴贝斯虫的顶质体基因组DNA序列,并对其总体的结构特征进行了详细的比对分析;另一方面,钓取了东方巴贝斯虫棒状体颈部蛋白2(RON2)基因信息,对RON2与AMA1的相互作用进行了初步研究。(1)B.orientalis顶质体基因组的测序分析对于顶质体基因组,根据基因组测序的高通量测序序列和cDNA文库钓取的部分顶质体DNA序列,结合NCBI公布的顶复门血液原虫顶质体DNA序列,选择其保守区设计引物,克隆东方巴贝斯虫顶质体DNA全长。测序结果用软件进行拼接,Artemis做注释。结果表明,东方巴贝斯虫顶质体基因组全长33200bp的环状分子,AT含量在78.9%,包含1个核糖体大亚基(LSU)、1个核糖体小亚基(SSU),38个编码蛋白的开放读码框以及24个转运RNA(tRNA)。其中38个ORF包括4个DNA依赖的RNA合成酶小亚基(rpoB、rpoC1、rpoC2a、rpoC2b)、17个核糖体蛋白、1个翻译延长因子(tufA)、2个Clp分子伴侣基因以及14个大小功能未知的假定蛋白。进一步对所获得的东方巴贝斯虫顶质体基因组DNA与NCBI上有报道的相关顶复门寄生虫作了详细的比对分析,综合的结果表明东方巴贝斯虫顶质体基因组从基因组大小,基因种类,基因结构,基因排列顺序,基因进化分析等一系列特征上都与牛巴贝斯虫的顶质体最为接近。(2)棒状体颈部蛋白RON2和AMA1基因的相互作用根据NCBI上公布的顶复门寄生虫的RON2序列及部分假定蛋白序列和东方巴贝斯虫基因组测序获得的部分序列,设计引物克隆东方巴贝斯虫棒状体颈部蛋白2(RON2)基因,获得的测序结果全长为4035bp,本研究选取了RON2与AMA1有相互作用的功能域进行截短表达,分别设计特异性引物克隆BoRON2-2、BoRON2-5,构建GST标签原核表达质粒pGEX-KG-RON2-2、pGEX-KG-RON2-5,高效表达。用纯化后的RON2-2、RON2-5重组蛋白进行Far-western实验,以及和AMA1蛋白的粘附ELISA实验。结果表明,重组表达的RON2-2及RON2-5与东方巴贝斯虫全虫抗原中的AMA1之间存在相互作用,并且二者之间的相互作用以一定的比例进行粘附。