论文部分内容阅读
目的： ENH(Enigma homolog)，又称PDLIM5，是PDZ-LIM蛋白结构域家族的成员。作为接头蛋白，ENH可以通过与α-actinin蛋白结合参与细胞骨架结构。同时，它能与细胞内重要的信号分子PKC、PKD及其底物相互作用，提高其底物磷酸化水平。通过序列分析，发现ENH存在潜在的PKA的磷酸化位点，由此推测，ENH可能是一个新的AKAP。最近研究发现，ENH表达降低能够促进肺动脉高压的产生。此外，ENH的磷酸化也被报道能够抑制血管平滑肌细胞的增殖。这些都与血管重构密切相关。通过研究“ENH作为AKAP在血管重构中的作用”，有助于拓宽我们对血管重构性疾病发病机制的认识，也为相应疾病的治疗引入潜在的新靶点。 方法： 在体外，通过过表达带标签的蛋白，利用免疫共沉淀的方法鉴定ENH与PKA以及分化抑制因子2(Inhibitors of differentiation/DNA binding2，ID2)间的相互作用及其中参与的氨基酸残基。采用体外刺激PKA的方法与点突变相结合，确定了ENH与ID2上潜在的PKA磷酸化位点。在体内，利用ENH全身敲除、内皮特异性敲除、平滑肌特异性敲除三个品系的转基因小鼠，建立由颈总动脉结扎所引起的血管重构模型以研究ENH在血管重构中的作用。 结果： 1)ENH能与PKA调节亚基RⅡα结合，并能被PKA磷酸化。ENH中228位点由丝氨酸突变为丙氨酸后，PKA对其的磷酸化显著减弱。 2)ID2能被PKA磷酸化，当其14位点由丝氨酸突变成丙氨酸后，显著减弱PKA对其的磷酸化作用。 3)ENH与ID2结合，且该结合不依赖于PDZ结构域。过表达ENH能增强PKA对ID2的磷酸化。 4)ENH能通过其LIM结构域与转录因子STAT3的C端结合。 5)ENH敲除的小鼠表现为主动脉扩张，并伴有动脉夹层的出现。 6)ENH敲除的小鼠能明显抑制由血管结扎所引起的新生内膜的形成。 7)平滑肌细胞及内皮细胞缺失ENH均能有效抑制由血管结扎所引起的新生内膜的形成。