论文部分内容阅读
目的 观察“双固一通”针法对糖尿病大鼠的治疗作用及对其神经内分泌免疫网络的调控作用，寻求其阻止糖尿病及其并发症发展的途径，并探讨其可能的作用机制。 方法 1．“双固一通”针法简介：来源于导师王华教授的“双固一通”针灸治疗学思想，针灸防治疾病注重治病求本，以正气为本，固护先天和后天是其基础和关键；通过“治”来达到“防”的目的，“治”是积极的、主动的“防”。双固，即固护人体先天之本和后天之本，选用具有固护先天(元气)的关元(或肾俞)和固护后天(胃气)的足三里(或三阴交)为主穴，固定使用；“一通”即疏通经脉，通泻病邪，用穴为阿是穴或随证取穴。本课题所采用的“双固一通”针法，即选取固护正气的足三里和关元为主穴，配用治疗糖尿病的经验穴胰俞进行针刺。 2．实验方法：180—220g Wistar大鼠93只，15只为正常对照(A组)，另78只行链脲左菌素腹腔注射造模，电解损毁PVN。造模成功的糖尿病大鼠随机分为7组：模型对照组(B组，n=15)，“胰俞”针刺组(C组，n=15)，“双固一通”针刺组(D组，n=15)，常规取穴针刺组(E组，n=15)，PVN(paraventricular nucleus，室旁核)损毁组(C’组，n=6)，PVN损毁并“双固一通”针刺组(D’组，n=6)，假损毁组(E’组，n=6)。对C、D、E和D’组进行2个疗程的治疗，每个疗程6天，疗程间隔2天。用血糖仪检测血糖；运用流式细胞仪检测全血T细胞亚群(CD4+／CD3+、CD8+／CD3+)；运用放射免疫分析法检测各组血浆胰岛素、血清IL-6和血浆Leptin(瘦素)水平；免疫组织化学SABC法检测下丘脑Leptin受体、NPY(neuropeptide Y，神经肽Y)表达；原位杂交法检测下丘脑Leptin受体mRNA和NPYmRNA表达；运用图象分析系统进行下丘脑Leptin受体、NPY及其相应mRNA免疫阳性物检测。 结果 1．对糖尿病大鼠的治疗作用：各针刺组在治疗后血糖水平均有不同程度的降低(P＜0.05)，组间比较，“双固一通”针刺组(D组)和常规取穴针刺组(E组)疗效好于“膜俞”针刺组(C组)，D组和E组间无显著性差异(P＞0.05)；各针刺组治疗后胰岛素水平与模型组无显著性差异(P＞0.05)，均低于正常对照组胰岛素水平(P＜0.05)；“胰俞”针刺治疗糖尿病后，饮水、进食量较模型组减少，治疗后体重较模型组增加，但差异均无显著性意义(P＞0.05)；“双固一通”针刺和常规取穴针刺均可使糖尿病大鼠的饮水、进食量有不同程度的减少(P＜0.05)，体重较模型组增加(P＜0.05)；“双固一通”针法改善饮水和进食较常规针刺组的效果更好(P＜0.05)。 2．流式细胞分析的结果显示：糖尿病大鼠CD4+T细胞比例显著低于正常组，而CDS+‘f细胞比例显著高于正常组，CD4一l一’f/CDS一卜f比值显著低于正常组。各针刺组治疗后CD4+T细胞比例有不同程度的升高，CDS+T细胞比例有不同程度的降低，CD4+T/CDS十T比值升高。组间比较，‘，双固一通”针刺组(D组)对免疫功能的调节作用最好。 3.放射免疫分析的结果显示:糖尿病大鼠血清IL一6水平显著高于正常，血浆LePtin水平显著低于正常(P<0.05)，“胰俞”针刺治疗使IL一6水平有降低趋势，但与模型组相比，无显著性差异(P>0.05)，“双固一通”针刺和常规取穴针刺均可使糖尿病大鼠升高的IL一6含量降低(P<0.05)，两组比较，以“双固一通”针刺组降低更明显(P<0.05);“胰俞”针刺治疗、“双固一通”针刺和常规取穴针刺均可使糖尿病大鼠降低的LePtill含量升一高(P<0.05)，三组间比较，以“双固一通’，组升高Leptin的效应最明显(P<0.05)。 4.免疫组织化学和原位杂交的结果显示:糖尿病大鼠(B组)下丘脑PvN(paraventri。t门ar，IL.clet.S，室旁核)、八I之C(areL.at。nL.e一ct.s，弓状核)部位LeptinR(Leptin receptor，瘦素受体)免疫阳性物平均吸光度值较正常大鼠明显减少，NPY免疫阳性物平均吸光度值较正常大鼠明显增大(P<0.05)，LH(一atera!一lyp。t一la一a:。。s，下丘脑外侧区)部位LePtinRmRNA免疫阳性物平均吸光度值和免疫阳性面积较正常大鼠明显减少，NPYmRNA免疫阳性物平均吸光度值和免疫阳性面积较正常大鼠明显增多(均P<0.05)，针刺治疗后，PvN、ARc部位LePtinR免疫阳性物有不同程度的增多，NpY表达减少(P<0.05)，LH部位LePtinR基因表达增多而NPY墓因表达减少(P<0.05)，组间比较，以 “双固一通”针刺治疗组的效应最明显(P<0.05)。 5.电生理的结果显示:PVN损毁后(C’组)，饮水、进食量较模型组减少，体重较模型组减少，LePtin水平显著，差异均有显著性意义(P<0.05);D’组中，“双固一通”针刺使PvN损毁糖尿病大鼠血糖降低，饮水、进食量有不同程度的减少(P<0.05)，体重较模型组增加(P<o，05)，降低的Leptin含量升高(l)<0.05);2周后，l，VN假损毁(E’组)对糖尿病大鼠血糖、饮水、摄食和体重、血浆瘦素水平的影响与模型大鼠之间的差异无显著性意义。 结论 1.“双固一通”针法对糖尿病大鼠的降糖作用确切，其作用与血浆胰岛素无关;可使其降低的CD4+T细胞比例升高，而使上升的CDS+T细胞比例降低，通过调节CD4+rf/CDS+T