略阳鸡孕酮合成相关基因表达的研究

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略阳鸡是陕西省著名的地方鸡品种。近年来,市场对略阳鸡需求剧增,但略阳鸡年产蛋量仅110枚左右,显然不能满足养殖户尽快扩繁的生产目标,并严重影响其经济效益。孕酮作为孕激素中重要的成分,对雌禽卵巢和卵泡发育具有重要作用。STAR、CYP11A1和HSD3B1是参与孕酮合成的关键基因,在略阳鸡的研究中鲜有报道。本试验以略阳鸡为研究对象,京红1号蛋鸡为对照,采用ELISA法检测卵巢组织孕酮的含量,通过q PCR法检测孕酮合成过程中关键基因STAR、CYP11A1和HSD3B1的表达量;运用生物信息学法预测和分析STAR、CYP11A1基因启动子区序列及调控元件。从分子水平探讨STAR和CYP11A1基因的转录调控与孕酮合成之间的关系。研究结果如下:1. 与京红1号蛋鸡相比,略阳鸡卵巢组织孕酮含量显著低于京红1号蛋鸡(P<0.05),略阳鸡卵巢组织STAR基因m RNA表达水平极显著高于京红1号蛋鸡(P<0.01),CYP11A1基因m RNA表达水平显著高于京红1号蛋鸡(P<0.05)。2. 成功扩增了STAR和CYP11A1基因启动子区序列;在STAR基因启动子区预测到3 个核心启动子;在CYP11A1基因启动子区预测到2个核心启动子,1个Cp G island;在CYP11A1基因启动子区预测到转录因子c/EBPβ的结合位点。3. 成功构建CYP11A1基因启动子的荧光素酶报告载体(LY-p GL3-CYP11A1-Promoter、JH-p GL3-CYP11A1-Promoter)和c/EBPβ过表达载体(pc DNA3.1(+)-c/EBPβ-CDS),共转染293T细胞后;结果发现,略阳鸡CYP11A1基因启动子的启动效率极显著提高(P<0.01);过表达c/EBPβ后,略阳鸡CYP11A1基因启动子活性极显著的增加(P<0.01)。提示:转录因子c/EBPβ正向调控CYP11A1基因的表达。综上可知,本研究阐述了略阳鸡卵巢组织中STAR和CYP11A1基因的表达水平及CYP11A1基因在孕酮合成过程中的调控机制。并发现在略阳鸡卵巢组织中,转录因子c/EBPβ正向调控CYP11A1基因的表达。有助于为略阳鸡繁殖性能的遗传改良提供理论依据。
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