Galectin-9缺失在小鼠肿瘤免疫中对CD8~+T细胞及调节性T细胞功能的影响

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目的:在小鼠肿瘤模型中探讨Galectin-9缺失对肿瘤生长和转移的影响,并且分析Galectin-9缺失对CD8+T细胞频率、表型和功能影响以及对Treg细胞频率影响,探讨Galectin-9在肿瘤免疫中的作用。方法:分别建立B16F10黑色素瘤G9KO-/-C57BL/6小鼠右后肢外侧皮下注射模型和EG7-OVA淋巴瘤G9KO-/-C57BL/6小鼠右后肢外侧皮下注射模型,待体内出现荷瘤开始,每2天监测肿瘤体积,3周后分别绘制两种肿瘤生长曲线并且比较G9KO-/-C57BL/6两组小鼠肿瘤生成差异;建立B16F10黑色素瘤G9KO-/-C57BL/6小鼠尾静脉注射模型,密切观察肺部肿瘤转移情况,2周后统计肺部黑色素瘤结节数量,观察G9KO-/-C57BL/6两组小鼠在肿瘤转移的差异;取B16F10黑色素瘤G9KO-/-C57BL/6小鼠右后肢皮下实体瘤模型,分别完全分离出肿瘤瘤体,用酶消化法提取肿瘤浸润淋巴细胞,并且制备成单细胞悬液,流式细胞术检测TIL中的CD8+T淋巴细胞频率以及表型,用佛波酯刺激CD8+T细胞4-6h,检测细胞分泌INF-量,分析CD8+T淋巴细胞功能。同时也检测TIL中CD4+Foxp3+Treg细胞的频率,分析CD8+T细胞频率与Treg细胞频率的比值。结果:在小鼠实体荷瘤模型中,G9KO小鼠相对于WT小鼠能明显抵制B16F10(P<0.05)和EG7(P<0.05)肿瘤在机体内的生长,延长小鼠存活时间;G9KO小鼠能显著抑制黑色素瘤向肺部的转移(P<0.001);流式检测显示G9KO小鼠相对于WT小鼠,在CD8+T淋巴细胞数量上没有差异,但G9KO小鼠能上调肿瘤局部CD8+T淋巴细胞频率(P<0.001),同时G9KO小鼠能明显下调功能耗竭CD8+T淋巴细胞表型(Tim-3+,PD-1+Tim-3+)的频率(P<0.05,P<0.001),G9KO小鼠能促进CD8+T细胞分泌INF-(P<0.01)。在肿瘤局部主要聚集着CD4+Foxp3+Treg细胞,G9KO小鼠相对于WT小鼠,能明显下调肿瘤局部的CD4+Foxp3+Treg细胞频率(P<0.01);G9KO小鼠增加了肿瘤局部CD8+T细胞数量降低Treg细胞数量,使得CD8/Tregs比值上升(P<0.001),结论:Galectin-9的缺失能延缓肿瘤在机体内的生长,抑制肿瘤的转移,减轻肿瘤特异性CD8+T细胞耗竭,并且能减弱肿瘤局部Treg细胞免疫抑制功能,进而增强机体抗肿瘤免疫。
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