论文部分内容阅读
目的:上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)是指在特定的生理和病理状态下上皮细胞向间质细胞转化的现象。肿瘤细胞发生侵袭和迁移的主要机制之一即肿瘤细胞发生了上皮间质转化。诱导细胞发生上皮间质转化的因素有很多,缺氧也被认为是其重要的诱导因素之一。槲皮素(Quercetin,Que)是广泛存在于植物中的天然黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用,已被证实可抑制多种肿瘤细胞的上皮间质转化进而抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移。但大量的实验研究仅证明了槲皮素在常氧条件下对肿瘤细胞上皮间质转化的抑制效应,目前尚无研究报道槲皮素在缺氧条件下对肿瘤细胞上皮间质转化的影响。本研究通过体外细胞实验探讨槲皮素对缺氧诱导的人肝癌Hep G2细胞上皮间质转化的影响及其可能的机制。方法:体外培养人肝癌Hep G2细胞,以100umol/L的氯化钴(Cobaltous chloride,Co Cl2)作用于细胞建立缺氧模型,将对数生长期的Hep G2细胞分为四组:对照组、Co Cl2组、Que组、Co Cl2+Que组,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度的槲皮素在常氧和缺氧条件下作用48h、72h后肝癌细胞的活力变化,并计算出相应条件下槲皮素对肝癌细胞的半数抑制浓度;采用细胞划痕实验检测槲皮素作用后四组肝癌细胞迁移的距离并比较其差异;采用q PCR和Western blotting法分别检测槲皮素作用后四组Hep G2细胞中缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1α)和上皮间质转化相关标志因子Snail、E-cadherin和vimentin的m RNA及蛋白的表达水平。结果:MTT结果显示槲皮素可显著抑制Hep G2细胞的增殖,且在一定的浓度范围内其抑制作用存在剂量依赖性。槲皮素在常氧、缺氧条件下作用48h和72h的IC50值分别为69.25±3.02umol/L、56.78±1.99umol/L和48.76±2.63umol/L、41.07±2.51umol/L。细胞划痕实验结果显示槲皮素能明显减缓常氧和缺氧条件下Hep G2细胞的迁移能力。q PCR实验结果显示槲皮素可使Snail、vimentin的m RNA表达降低和E-cadherin的m RNA表达增加,而对HIF-1α的m RNA表达无影响。Western blotting实验结果显示槲皮素可下调HIF-1α、Snail和vimentin的蛋白表达和上调E-cadherin的蛋白表达。结论:槲皮素能显著抑制缺氧诱导的人肝癌Hep G2细胞的上皮间质转化,其机制可能与槲皮素抑制缺氧诱导的人肝癌细胞中HIF-1α蛋白的累积有关。