论文部分内容阅读
本文以琥珀酸脱氢酶（SDH）、乳酸脱氢酶（LDH）和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）为评价指标,运用正交试验法筛选日本血吸虫细胞的培养条件,探讨这3个评价指标的可靠性;并用筛选出的培养条件培养日本血吸虫细胞,研究日本血吸虫培养细胞抗原含量的动态变化。所获结果简述如下: 1.日本血吸虫细胞培养条件的选择 以SDH、LDH和G-6-PDH为评价指标,运用正交试验法研究合成培养基（TC-199、RPMI-1640和DMEM）、细胞外基质（鼠尾胶、肝基质与肺基质）和血清浓度（5%、10%及20%）3个因素在3个不同水平对虫龄为21d的日本血吸虫培养细胞的影响。培养第5d,对日本血吸虫培养细胞进行SDH染色;培养第14d,分别进行LDH、G-6-PDH染色;培养第28d,进行LDH染色。将染色后的培养细胞置于Olympus-BH2显微镜下观察并拍照,HPIAS-2000图像分析仪测量它们的含量,用SPSS10.0作统计分析。结果显示:培养早期,不论以SDH或LDH,还是G-6-PDH为指标,RPMI-1640含20%小牛血清组成的培养基培养接种于肝基质上的日本血吸虫细胞,培养细胞的SDH、LDH、G-6-PDH活性最强。血清浓度对培养细胞酶活性的影响最大,其次是细胞外基质,影响最小的是合成培养基。其中,血清浓度对3种酶活性的影响差异均显著（P<0.01或P<0.05）;基质对SDH、LDH活性的影响差异显著（P<0.01或P<0.05）,而对G-6-PDH活性的影响差异不显著（P>0.05）;合成培养基的影响均无差异（P>0.05）。培养28d以后,DMEM含5%小牛血清组成的培养基培养接种于肝基质上的日本血吸虫细胞,培养细胞的LDH活性最强。血清浓度对培养细胞LDH活性的影响最大,其次是细胞外基质,影响最小的是合成培养基。血清浓度和细胞外基质对LDH活性的影响差异均显著（P>0.05）,合成培养基的影响均无显著性差异（P>0.05）。因此,选择3种酶中任一,均可用来评价日本血吸虫细胞培养条件的优劣。在培养早期,选择三种合成培养基中的任一种与20%小牛血清组成的培养基培养接种于肝基质上的日本血吸虫细胞,培养细胞的SDH、LDH、G-6-PDH活性最强。培养28d以后,三种培