论文部分内容阅读
帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,在60岁以上的人群中患病率达到2%,随着年龄的增加,其发病率逐年增长。PD的主要病理特征为中脑黑质(substantia nigra,SN)多巴胺(dopamine,DA)能神经元选择性丢失,纹状体DA含量减少,残存的DA能神经元内出现路易小体,其主要成分为聚集的alpha-突触核蛋白。Braak提出PD脑内病理进展的六级分级学说在国际上已被广泛接受,他指出黑质病变可能已经是PD发生的中期或中晚期(第三或第四阶段),故临床上通过运动症状改变而诊断的PD病人已经到达疾病的中晚期阶段。研究表明,对于散发性PD病人,在出现运动症状之前,98.6%的病人会出现一些非运动症状,包括嗅觉障碍,便秘,睡眠障碍,心血管功能障碍等。PD的非运动系统症状越来越受到研究者的关注。其中,胃肠道功能障碍的发生率是PD非运动症状中最高的,可达80%以上,尤其是胃排空延迟,在PD病人中的发生率高达70%-100%。本实验在携带人突变型alpha-突触核蛋白(A53T)的PD转基因动物模型上,观察了疾病进展过程中,小鼠运动行为和胃肠功能的变化,以期评价胃肠功能和运动行为发生改变的时间,并为进一步阐明PD中胃肠道功能障碍的中枢机制奠定基础。本实验在PD转基因小鼠上,在不同年龄阶段,应用旋转棒法检测了运动协调能力的改变,免疫荧光技术观察中脑SN内DA能神经元数量的改变,应用胃排空和小肠推进等不同方法,测定小鼠胃肠功能的变化。结果如下:1.A53T PD转基因小鼠基因型鉴定:A53T+/-与野生型小鼠杂交,后代阳性转基因小鼠在248 bp处有明显的条带,与目的基因alpha-突触核蛋白c DNA片段的预期位置相符,证实人突变型alpha-突触核蛋白基因已整合到小鼠基因组,并可以稳定传代。2.在A53T PD转基因雌鼠中,23-24月龄组小鼠在旋转棒上的停留时间降低了75%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。而16-17月龄和19-20月龄组,A53T PD转基因雌鼠在旋转棒上停留时间未观察到变化。3.在A53T PD转基因雄鼠中,19-20月龄组小鼠在旋转棒上的停留时间降低了45%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。而12-13月龄和16-17月龄组,A53T PD转基因雄鼠在旋转棒上停留时间未观察到明显变化。4.在A53T PD转基因雌鼠中,17月龄和19月龄组小鼠的SN DA能神经元数目分别减少15.4%和20.1%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。而12月龄和15月龄组,A53T PD转基因雌鼠SN DA能神经元数目未观察到明显变化。5.在A53T PD转基因雄鼠中,15月龄、17月龄和24月龄组小鼠的SN DA能神经元数目分别减少了18.9%,22.3%和38.0%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。12月龄组A53T PD转基因雄鼠SN DA能神经元数目未观察到明显变化。6.在A53T PD转基因雌鼠中,17月龄组小鼠的胃排空率升高了50%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05),19月龄组小鼠的胃排空率未观察到明显变化。15月龄组的A53T PD转基因雌鼠的小肠推进率降低了24.8%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。17月龄和19月龄组的A53T PD转基因雌鼠的小肠推进率未观察到明显变化。7.在A53T PD转基因雄鼠中,15月龄组小鼠的胃排空率升高了45%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05),17月龄组A53T PD转基因雄鼠的胃排空率降低30%,与对照组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。15月龄和17月龄组的A53T PD转基因雄鼠的小肠推进率未观察到明显变化。上述结果表明,在这种携带人突变型alpha-突触核蛋白(A53T)PD转基因小鼠中,雄鼠的发病年龄要早于雌鼠,伴随着SN DA能神经元数目的降低,动物会出现运动协调能力的降低,而在运动症状出现之前,PD转基因动物就会出现胃肠动力的改变。本研究提示,在PD早期,在出现运动症状之前,可能会出现非运动症状,如胃肠功能障碍,而这些功能障碍有可能会作为PD早期诊断和早期干预的靶点,但PD早期胃肠道功能障碍的机制尚需进一步探讨。