研究生：刘典梅 导师：赵书林（教授）蛋白质是生物体内最重要的物质之一，是生命的基础。蛋白质的定量分析是生物化学、药学和其它生物学科及生命科学研究中经常涉及的内容，也是临床化验和食品检验常规的分析项目。血清白蛋白是血浆中具有广泛结合能力的蛋白质，能结合大、中、小分子化合物。同时血清白蛋白又是形成血浆胶渗透压的主要成份，它在维持体液的正常分布，保持血容量及血压等方面起重要作用。因此研究蛋白质与金属配合物的相互作用并建立蛋白质的分析测试新方法，对于疾病诊断及生命科学研究均具有十分重要的意义。本文以开发特殊金属配合物为基础，探索了其与蛋白质形成超分子化合物的条件，研究了该化合物的光谱特征及蛋白质与金属配合物作用的反应机理，发展了一系列蛋白质分子的新型光谱探针，从而建立了四种测定蛋白质含量的新方法。其研究内容分为四个部分：第一部分：详细考察了蛋白质与钡（Ⅱ）-偶氮氯膦Ⅲ（CPA Ⅲ）配合物的相互作用及氨基酸、尿素、金属离子等物质对反应的影响，确立了反应的最佳条件并研究了其吸收光谱特征。蓝色的Ba(Ⅱ)-CPAⅢ与蛋白质作用后，其吸收光谱的强度呈线性降低。表观摩尔吸光系数达6.86×105 L·mol-1·cm-1,线性范围为0~40 mg/L。据此建立了分光光度法测定蛋白质含量的新方法。该方法的灵敏度高，选择性好，直接应用于人血清蛋白质总量的测定，结果满意。同时，对反应机理进行了初步的探讨，认为反应中蛋白质的作用机理类似于阳离子表面活性剂，以静电引力与金属配合物相互作用。第二部分：研究了在乙醇存在下，蛋白质与钡（Ⅱ）- 对乙酰基偶氮氯膦（CPA-pA）配合物的相互作用，建立了以Ba(Ⅱ)-CPA-pA配合物为光谱探针测定蛋白质的灵敏方法。在pH 2.0~2.8 的酸性介质中，有表面活性剂Triton X-100的存在时，蛋白质与该配合物作用，使配合物在649 nm 处的吸收峰值下降，且吸光度下降值与蛋白质浓度成正比。该法的表观摩尔吸光系数为1.56×106<WP=6>L·mol-1·cm-1, 线性范围为0~20 mg/L。应用于人血清样品蛋白质总量的测定，结果与MO(Ⅵ)-邻苯二酚紫（PV）法一致。第三部分：研究了蛋白质与Cu(Ⅱ)与对硝基偶氮氯膦（CPA-pN）的相互作用，发现蛋白质的加入能使配合物溶液的紫红色褪为紫色。以此配合物作为蛋白质的光谱探针，可测定0~40 mg/L 的蛋白质。方法的摩尔吸光系数为5.43×105 L·mol-1·cm-1,灵敏度虽不及前二者高，但稳定性、重复性和线性关系均很好。同时采用摩尔比法和Chial法测定了配合物与蛋白质的结合个数，证明蛋白质与Cu(Ⅱ)- CPA-pN配合物作用有两种结合。第四部分：首次发现在一定条件下，钡（Ⅱ）能与CPA-pN发生β型显色反应，形成β型配合物，并在736 nm处有强吸收。而蛋白质的存在则会使β吸收峰值降低，且峰值下降的程度与蛋白质浓度成正比。基于这一现象，建立了一种高灵敏测定蛋白质的方法，该法的摩尔吸光系数为5.37×106 L·mol-1·cm-1，可检测1~10 mg/L的蛋白质。将该法用于人血清样品中总蛋白质含量的测定获得了满意的结果。对反应机理进行了初步的探讨，认为蛋白质的作用与阳离子表面活性的作用类似。