人/鲑降钙素嵌合基因在大肠杆菌中的串联表达

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降钙素(Calcitonin,CT)是一种由32个氨基酸残基组成的多肽类激素,它广泛存在于哺乳动物的甲状腺和鱼类的后腮体中,其主要生理功能是参与体内的钙磷代谢,通过抑制破骨细胞的活性,促进钙在骨中的沉淀,从而降低血钙含量。天然降钙素中鲑鱼降钙素(sCT)的活性最高,约为人降钙素(hCT)的40倍。目前,鲑鱼降钙素已被广泛应用于临床。 为保证降钙素生物活性的同时尽量降低其在人体内的抗原性,本实验室人工合成了新型人/鲑降钙素嵌合基因(己申请专利)。为提高表达量,我们采用串联表达的方法。首先设计一小段柔性连接肽,经过SWISS-MODEL与3D-PSSM蛋白质结构预测,通过此短肽首尾相接的串联CT中降钙素的活性位点和抗原位点均可以得到充分暴露。因此,我们用同尾酶法构建了多拷贝串联基因表达质粒pLEX-nCT(n=1,2,3,4,5)(每段CT基因之间以编码连接肽的DNA连接),并导入大肠杆菌GI724中表达。表达产物经SDS-PAGE检测,1-5拷贝串联CT基因的表达均不明显。Westernblotting检测结果显示,串联CT具有人源降钙素的抗原性。本工作为降钙素基因工程的进一步研究和应用提供了实验基础。
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