酿酒酵母胞外蛋白酶A活性研究

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本文以酿酒酵母2144为研究对象,采用YNB培养基,对酵母在不同生长条件下发酵液胞外蛋白酶A活性进行研究,验证了高渗条件下酵母提前分泌蛋白酶A酶原的现象并对蛋白酶A酶原的两种催化途径进行了比较研究。1.通过对酵母在不同生长条件下发酵液胞外蛋白酶A活性研究发现:发酵液pH5.5,发酵温度29℃,发酵时间36~40h条件下在糖浓度2%~16%水平时蛋白酶A活性相对较高。当糖浓度为20%水平发酵进行16h时出现较高活性,同时发现在高渗培养条件下菌体对数期显著延长,进入稳定期后出现二次生长现象。2.利用高糖浓度YNB培养基培养,以Sephadex G-25和Sephadex G-75为分离手段,以SDS-PAGE以及蛋白酶A专一性荧光底物的检测方法为分析手段,确定蛋白酶A酶原在高糖浓度条件下在培养前期由酵母分泌到发酵液中,这是酵母细胞在高渗条件下的一种应激反应。3.通过调节发酵液pH和加入蛋白酶B抑制剂PMSF两种途径研究酵母胞外蛋白酶A自主催化,发现在正常条件和高渗条件下,pH都是影响发酵液中蛋白酶A活性的主要因素,两种培养条件在pH5.5水平酵母胞外蛋白酶A活性都相对较高。
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