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本研究共分为三部分。
第一部分 LPS刺激肺成纤维细胞后COXs及其产物PGE2和PGD2表达的时程变化
目的:探讨LPS刺激HFL-1及原代鼠肺成纤维细胞后COXs(COX-1和COX-2)及其产物PGE2，PGD2表达的时程变化
方法:
在体外培养HFL-1（人胚肺成纤维细胞株）或原代培养肺成纤维细胞，将HFL-1或原代培养大鼠肺成纤维细胞随机均匀接种到六孔板:分别以LPS刺激6小时、12小时、24小时、48小时、72小时后提取细胞蛋白标本及细胞培养上清液标本，分别检测在LPS刺激后不同时间点COX1/COX-2和PGE2/PGD2的表达情况。
结果:
检测COX-2蛋白表达情况发现，LPS刺激HFL-1后，COX-2蛋白表达呈双峰，分别在第6小时和第48小时。LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞后，COX-2蛋白表达亦呈双峰，分别在第6小时和第48小时，且第二个峰较第一个峰更明显。与此同时，以ELISA检测PGE2和PGD2表达水平，在HFL-1和原代大鼠肺成纤维细胞实验中，PGE2表达均在第6小时组达最高峰，相反，PGD2表达在第48小时达最高水平。LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纤维细胞后COX-1蛋白表达无明显变化。
结论:
LPS刺激肺成纤维细胞后COX-2蛋白呈双峰表达，开始在第6小时，第二高峰在第48小时;而COX-1蛋白的表达无明显变化。与此同时，伴随PGE2表达高峰在第6小时，而PGD2的表达高峰在第48小时。
第二部分 消退素D1对LPS刺激肺成纤维细胞后第6小时和第48小时COXs及其产物PGE2和PGD2表达的影响
目的:探讨消退素D1对LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纤维细胞后第6小时和第48小时COXs及其产物PGE2，PGD2表达的影响
方法:
1、消退素D1对LPS刺激HFL-1细胞后6小时COXs及其产物PGE2，PGD2表达的影响。实验分为七组:1）正常对照组;2）LPS刺激组;3) LPS+RvD1(10nM)组;4）LPS+RvD1(50nM)组;5)LPS+RvD1(100nM)组;6）LPS+乙醇组;7）RvD1(100nM)组。消退素D1对LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞后6小时COXs及其产物PGE2，PGD2表达的影响体。实验分为五组:1）正常对照组;2）LPS刺激组;3）LPS+RvD1(100nM)组;4)LPS+乙醇组;5）RvD1(100nM)组。
2、消退素D1对LPS刺激HFL-1细胞后48小时COXs及其产物PGE2，PGD2表达的影响体。实验分为七组:1）正常对照组;2）LPS刺激组;3）LPS+RvD1(10nM)组;4)LPS+RvD1(50nM)组;5）LPS+RvD1(100nM)组;6)LPS+乙醇组;7）RvD1(100nM)组。消退素D1对LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞后48小时COXs及其产物PGE2，PGD2表达的影响体。实验分为五组:1）正常对照组;2）LPS刺激组;3）LPS+RvD1(100nM)组;4）LPS+乙醇组;5）RvD1(100nM)组。
所有实验组提取标本后，检测COX1/COX-2和PGE2/PGD2的表达情况。
结果:
1.在研究消退素D1对LPS刺激HFL-1细胞后6小时COXs及其产物表达影响的实验中，消退素D1能够剂量依赖性抑制COX-2蛋白表达。消退素D1同样能够显著抑制LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞后6小时COX-2蛋白表达。然而，消退素D1对LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纤维细胞后6小时COX-1蛋白表达均无明显影响。另外，通过ELISA检测以上各实验组中细胞培养上清液PGE2和PGD2表达水平，结果发现，在HFL-1细胞株实验中，消退素D1能剂量依赖性降低PGE2表达水平，在原代鼠肺成纤维细胞实验中，100nM消退素D1能明显降低PGE2表达水平。相反，虽然LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纤维细胞后6小时PGD2表达水平增加，但消退素D1对其影响均不明显。
2.在LPS刺激HFL-1细胞后48小时实验中，消退素D1能够剂量依赖性增加COX-2蛋白表达。消退素D1同样能够显著增加LPS刺激原代鼠肺成纤维细胞后48小时COX-2蛋白表达。然而，消退素D1对LPS刺激HFL-1及原代鼠肺成纤维细胞后48小时COX-1蛋白表达均无明显影响。另外，同样检测以上各实验组中细胞培养上清液中PGE2和PGD2表达水平，结果发现，在HFL-1细胞株实验中，消退素D1能剂量依赖性增加PGD2表达水平，在原代大鼠肺成纤维细胞实验中，100nM消退素D1能明显增加PGD2表达水平。相反，消退素D1对LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纤维细胞后48小时PGE2表达水平均无明显影响。
结论:
消退素D1能明显抑制LPS刺激肺成纤维细胞6小时后COX-2及其产物PGE2的表达，相反，却能明显增加LPS刺激肺成纤维细胞48小时后COX-2及其产物PGD2的表达。
第三部分 消退素D1双向调控LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞后COX-2表达的作用机制
目的:探讨消退素D1双向调控LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞后COX-2表达的作用机制。
方法:
1.研究LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞6小时和48小时后是否通过ERK1/2或PI3K/Akt信号通路介导，通过分别给予ERK1/2(UO126)和PI3K/Akt(LY294002)通路的特异性抑制剂后检测COX-2蛋白表达水平。
2.消退素D1对LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞后PI3K/AKT和ERK1/2通路活化的影响，通过检测了p-AKT和p-ERK1/2水平。
结果:
1.LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞6小时后COX-2蛋白表达部分通过ERK1/2和PI3K/Akt信号通路介导;然而LPS刺激原代大鼠肺成纤维细胞48小时后COX-2蛋白表达并非通过ERK1/2和PI3K/Akt信号通路介导。
2.消退素D1能明显抑制LPS刺激后第30分钟p-AKT、p-ERK2(p42)水平，而对p-ERK1(p44)水平无明显抑制作用。
结论:
消退素D1抑制LPS刺激原代鼠肺成纤维细胞6小时后COX-2蛋白表达可能部分通过PI3K/Akt和ERK1/2信号通路介导，而消退素D1增加LPS刺激原代鼠肺成纤维细胞48小时后COX-2蛋白表达的具体机制有待进一步研究。