由Pseudomonas syringae pv.actinidiae(PSA)引起的猕猴桃细菌性溃疡病是猕猴桃生产上重要的毁灭性病害,该病害于1984年在日本首次报道,2008年后,该病害在意大利、新西兰、智利等猕猴桃栽培区爆发流行,已成为世界性病害(“2008 outbreak”,world disease)。该病害发病率高、流行速度快,常造成整树死亡以及大面积毁园。然而,目前对该病害致病机制知之甚少,对其认识不够深入,缺乏有效的防治措施。大量研究表明,T3SS主要通过一套针头状装置,将多种类型的效应蛋白(effector)注射进入植物细胞,干扰寄主免疫反应或正常生理过程,从而达到成功侵染的目的。我们前期发现病菌三型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)为PSA致病所必需,但对其作用机制不清楚。PSA拥有约30个三型效应蛋白,而在侵染寄主时可能只有部分发挥作用,且作用方式不一,对致病贡献不等。本研究使用农杆菌介导的瞬时表达体系评估筛选PSA三型效应蛋白,初步发掘与非寄主烟草互作的效应蛋白及其可能的作用方式;并通过生物信息学分析、基因敲除、RT-PCR等技术对效应蛋白HopX3(抑制BAX诱导的坏死)进行初步的功能分析,为进一步明确PSA致病机制、发掘抗病基因提供依据。主要结果如下:1.通过对克隆获得的32个预测候选effector,进行酶切、连接,成功构建了19个重组载体;利用农杆菌瞬时表达体系,在本氏烟草上筛选到10个能够引起干扰烟草生理反应的PSA效应基因表达蛋白。其中有5个效应基因分别为23315(HopZ5-1)、3610(HopBB1-1)、3555(HopBB1-2)、29455(HopAU1)、HopF2在烟草叶片细胞中促进细胞坏死,5个抑制BAX诱导的细胞坏死的效应基因,分别为7905(secreted effector HopW1)、3510(HopX3)、11535(AvrPto5)、3480(AvrB4|1)、3560(HopAF1)。2.HopX3进化树分析结果表明HopX3属于HopX家族,位于PSA的EEL(exchangeable effector locus),在Psa biovar1、2和3中均存在。在T3SS诱导培养条件下,HopX3上调表达。将T3SS结构基因敲除后,细菌不能将效应蛋白分泌到胞外,此时HopX3仍然上调表达,但表达模式与野生型有差异。将敲除突变体M7ΔHopX3,接种美味猕猴桃(Actinidia deliciosa)和中华猕猴桃(Actinidia chinensis Planch)的枝条,其致病力与野生型相比无显著差异。