研究背景：　　脂肪肝(fatty liver disease，FLD)，是最常见的引起慢性肝病的疾病，威胁着全世界尤其是发展中国家人类的健康。肝病指南明确指出，FLD与代谢相关危险因素有密切的关系，尤其是肥胖、2型糖尿病和血脂代谢障碍。FLD分为酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease，AFLD)和非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)以及两者同时存在。NAFLD包括单纯性脂肪性肝病和非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）。NASH的发病机制与代谢紊乱和内质网（endoplasmic reticulum,ER）稳态相关。gp78也称为自分泌因子受体（autocrine motility factor receptor，AMFR），是一种E3泛素连接酶，在保护细胞免受内质网应激损伤中起到重要的作用。已有研究证实，gp78在调节小鼠脂肪和能量代谢中发挥着重要的作用。然而目前关于gp78在肝细胞脂肪代谢中的具体作用还不清楚。本研究中我们将进一步发现gp78在肝细胞脂肪代谢中的作用以及探讨相关的机制。研究目的：　　1.在细胞水平建立肝细胞脂肪变性模型，明确gp78在肝细胞发生脂肪变性过程中表达水平的变化；　　2.在发生脂肪变性的肝细胞中过表达或沉默gp78后，观察肝细胞脂肪变性的程度；　　3.明确过表达或沉默 gp78对脂肪分化/代谢相关蛋白表达的影响；　　4.研究gp78在肝细胞脂肪变性中的作用机制。　　研究方法：　　1.用一定浓度的油酸刺激小鼠肝细胞（AML12），应用油红O染色的方法对细胞内的脂滴进行染色，应用相差显微镜对细胞内脂滴进行观察拍照，应用甘油三酯测定方法对细胞内甘油三酯含量进行检测，从而确定肝细胞脂肪变性的程度；　　2.构建真核表达质粒PCMV5-HA-gp78，设计并验证gp78的有效 siRNA干扰序列。应用脂质体转染的方法向细胞中转染质粒或RNA；　　3.提取细胞蛋白和RNA，分别应用western blot和Real time PCR对目的基因的表达水平进行检测；　　4.应用免疫荧光法明确gp78与Cidec在亚细胞的定位，以及应用免疫共沉淀技术确定gp78在肝细胞脂肪变性过程中与Cidec是否存在直接的直接相互作用关系。　　研究结果：　　1.应用一定浓度的油酸刺激小鼠肝细胞（AML12），在刺激后的0h，12h，24h收集细胞，应用油红O染色以及相差显微镜观察发现，随着刺激时间延长，细胞内脂滴数目明显增多，脂滴明显增大，说明肝细胞脂肪变性模型建立成功。并同时在对应的时间点，提取细胞蛋白质和RNA，检测细胞内gp78的表达水平，发现随着刺激时间延长，gp78的表达含量也逐渐升高。　　2.应用脂质体转染过表达gp78和瞬转gp78-siRNA沉默gp78，发现与未处理对照组相比，过表达gp78组肝细胞内脂滴数目增多，体积增大；而沉默gp78组脂滴数目减少，体积减小。　　3.在研究过程中，Wenstern Blot结果显示过表达或沉默gp78后，脂滴表面蛋白Cidec和PPARγ表达水平的变化与gp78一致。而共同过表达gp78和Cidec后，细胞内脂滴数目显著增多，体积显著增大。　　4.免疫荧光结果显示，gp78和Cidec在脂滴表面存在共同的亚细胞定位；免疫共沉淀结果显示gp78和Cidec存在直接相互作用关系。　　结论：　　本研究证实，在体外肝细胞脂肪变性过程中，gp78起到了重要的促进作用。gp78可促进肝细胞内Cidec、PPARγ等脂滴表面蛋白的表达，并且与Cidec可直接相互作用协同促进肝细胞发生脂肪变性；沉默gp78可逆转肝细胞发生脂肪变性的程度，因此gp78有可能成为脂肪肝的新的治疗靶点。而具体的机制则有待进一步的研究证实。