慢病毒载体介导hTERT基因修饰人腮腺多形性腺瘤细胞的实验研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:talisa
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目的:建立人腮腺多形性腺瘤有限细胞系,探讨建立永生化人腮腺多形性腺瘤细胞的实验研究。   方法:取人腮腺多形性腺瘤患者原发肿瘤进行原代培养,观察细胞的形态特征,绘制细胞生长曲线,采用免疫细胞化学检测细胞内特异性抗原标志物(CK8、CK19、Calp、SMA、Vim),对细胞进行鉴定;构建pGC-FU-hTERT慢病毒载体,转染原代培养的人腮腺多形性腺瘤细胞,通过绘制细胞生长曲线、并通过Realtime PCR、Western Blot的方法在mRNA和蛋白水平上检测hTERT的表达情况。   结果:人腮腺多形性腺瘤细胞体外培养时间约80d,传代至16代,细胞呈短梭形、多角形,肿瘤性腺上皮细胞角蛋白弱阳性,肿瘤性肌上皮细胞肌动蛋白、钙调蛋白、波形蛋白阳性;转染后人腮腺多形性腺瘤细胞hTERT mRNA表达量显著上调,同时检测到hTERT蛋白的表达,细胞增殖能力有一定程度的增强,生存周期有一定的延长,细胞表型未发生转化。   结论:人腮腺多形性腺瘤细胞能在体外连续传达,建立了人腮腺多形性腺瘤有限细胞系;人腮腺多形性腺瘤细胞的永生化有待进一步的实验研究。
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