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树突状细胞(Dendritic cells，DC)是体内功能最强的抗原提呈细胞，能够有效的摄取处理抗原，并提呈给T细胞，诱导细胞毒性效应T细胞，激发体内免疫反应。DC作为T细胞刺激剂，常应用于肿瘤疫苗的制备。但DC不是一个单一的细胞群体，除了可以诱导肿瘤特异性免疫反应，它还参与肿瘤耐受的形成。临床上DC肿瘤疫苗迄今尚未取得令人信服的结果，究其原因与肿瘤干扰宿主免疫功能、免疫细胞自身缺陷等密切相关，但确切机制尚不清楚。作为抗原提呈细胞，DC是体内重要的免疫细胞，但人类DC并非为单一功能的细胞群，DC除了能启动特异性免疫反应外，还可以下调特异性免疫反应。DC肿瘤疫苗的临床效果不佳可能与DC的制备纯度、宿主自身的免疫反应等相关。其中DC的分化过程中出现的DC亚群比例漂移的改变可能是一个重要原因。DC起源于体内多功能造血干细胞(HSC)，主要可分为两个亚群：骨髓系来源的骨髓样树突状细胞(myeloid dendritic cell，DC1)和淋巴系来源的浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell，DC2)。两者在表型，迁移方式、分泌细胞因子以及抗击肿瘤能力方面均各具特色。DC1作为经典的T细胞刺激剂，可有效的提呈、处理肿瘤抗原，激发体内的抗肿瘤免疫应答。而DC2具有双重性作用，不仅可以介导肿瘤免疫应答，且在一定条件下能够诱导肿瘤免疫耐受。DC1和DC2分别来自不同的前体细胞。DC1源自骨髓样树突状细胞前体细胞(myeloid dendritic cell precursors pre-DC1)，而DC2主要由浆细胞样树突状细胞前体细胞(plasmacytoid dendritic cell precursors pre-DC2)衍生。多数研究表明肿瘤微环境中的DC数量减少，且功能受抑制。肿瘤微环境中DC1／DC2比例的改变称之为DC亚群比例的漂移。一些研究还发现在肿瘤患者外周血中pre-DC1／pre-DC2亚群比例改变且功能异常。肿瘤局部微环境中的两类DC的亚群比例失衡及肿瘤患者体内pre-DC1／pre-DC2的亚群比例的漂移推测肿瘤可能影响pre-DC的亚群比例的漂移甚至可能通过这一途径参与免疫逃逸机制。卵巢癌作为妇科恶性肿瘤中致死率最高的恶性肿瘤，起病隐袭，预后差。临床研究发现大多数患者初诊时已有广泛的腹腔内转移，卵巢癌的这一独特的生物学行为与宿主腹腔免疫缺陷有关。在卵巢癌患者腹腔中的多种免疫活性细胞包括T细胞、NK细胞、树突状细胞等均有不同程度的数量减少和功能缺陷。体内研究表明卵巢癌患者腹水中DC1数量减少，而DC2的聚集导致刺激T细胞增殖低下，不能很有效的激发抗肿瘤免疫反应。另外卵巢癌患者外周血中显示pre-DC1和pre-DC2的比例也存在改变。根据先前研究结果，我们有理由推测卵巢癌可能通过调控两类pre-DC比例来影响两类pre-DC的亚群漂移，并可能通过此途径参与卵巢癌腹腔局部免疫缺陷的形成。本研究以脐血来源的CD34~+干细胞在体外通过细胞因子的诱导扩增为DC前体细胞(pre-DC)，并与不同作用浓度的卵巢癌细胞株SKOV3上清共培养，采用流式细胞仪(Flow cytometry，FCM)检测两类pre-DC表面抗原的表达，以观察卵巢癌细胞上清对pre-DC亚群比例漂移的影响，为卵巢癌免疫治疗提供新的思路。材料和方法本实验以脐血来源的CD34~+干细胞通过细胞因子的诱导在体外扩增分化为pre-DC。细胞因子FLT3-L、SCF作用浓度分别是100ng／ml和50ng／ml。培养收集卵巢癌细胞株SKOV3上清，经透析法浓缩卵巢癌细胞株SKOV3上清。将上清与pre-DC共培养，经不同浓度上清(0％、25％、50％、75％、100％、150％)作用后，采用流式细胞仪(Flow cytometry，FCM)检测pre-DC表面抗原。检测的表面抗原分别是CD123、CD11c、HLA-DR、CD80、CD86。结果1卵巢癌细胞株上清促进CD11c的表达，具有统计学差异(P=0.032)。当卵巢癌细胞株上清浓度从0％升高至50％时，CD11c的表达上升，而上清浓度从50％升高至150％时，CD11c的表达较50％时略下降，但总体呈上升的趋势。CD11c抗原随卵巢癌细胞株上清浓度升高而变化的趋势具有统计学差异(P=0.026)。卵巢癌细胞株上清不促进CD123的表达，无统计学差异(P=0.330)。当卵巢癌细胞株上清浓度从0％升高至150％时，CD123表达呈上升趋势。2卵巢癌细胞株上清促进HLA-DR的表达，具有统计学差异(P=0.009)。随着卵巢癌细胞株上清浓度从0％升高至150％，HLA-DR的表达稳步上升，并在150％浓度时达到高峰。HLA-DR抗原随卵巢癌细胞株上清浓度升高而升高的趋势具有统计学差异(P=0.000)。3卵巢癌细胞株上清不促进CD80、CD86的表达，无统计学差异(P=0.167、P=0.402)。当卵巢癌细胞株上清浓度从0％升高至50％时，CD80的表达上升，随着上清浓度继续从50％升高至150％时，CD80的表达较50％时略下降；而CD86的表达与CD80相似，当卵巢癌细胞株上清浓度从0％升高至75％时，CD86的表达缓慢上升，随着上清浓度继续从75％升高至150％时，CD86的表达较75％时略下降。结论卵巢癌细胞株上清可能通过调控两类DC前体细胞的比例导致两类DC前体细胞的亚群漂移，并可能通过此途径参与腹腔免疫缺陷的形成。