目的:肌腱病是临床常见病和多发病,其发病机制复杂,目前仍未完全阐明。相应之,肌腱病现在仍是经验性对症治疗,缺乏明确的治疗方案。其中一个重要的原因是缺乏良好的肌腱病动物模型。本实验探讨一种动物模型建立的方法,并基于此模型的基础上,模拟目前临床上肌腱病的治疗方法,评估治疗机制和治疗效果,为临床治疗肌腱病提供理论依据。方法:培养分离肌腱干细胞(TSCs),用Kartogenin(KGN)作用于体外培养的TSCs,观察其对TSCs性状的影响,包括细胞增殖,分化,mRNA表达。体内将KGN注射或植入多个部位的肌腱,观察KGN诱导肌腱病形成,筛选出可重复性好的建模方法。肌腱病模型构建成功后,模拟临床治疗的方法,将富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)在肌腱病早期和晚期经皮注射入受损肌腱,观察PRP治疗肌腱病的效果,并在体外将PRP和KGN干预细胞培养,在细胞层面研究PRP对肌腱病的作用机制。最后将临床上用以治疗肌腱病的Toradol(Ketorolac tromethamine,KT)在体外和体内作用于肌腱细胞和肌腱组织,观察和研究Toradol治疗肌腱病的机制和效果。结果:成功分离培养TSCs后,将不同浓度的KGN作用于细胞培养,发现KGN显著促进了TSCs向软骨细胞分化,相应软骨标志分子基因表达显著升高。KGN与藻酸盐复合为胶珠(bead)植入大鼠跟腱可以模拟肌腱病的发病过程和病理特征,包括细胞增多,肌腱纤维结构紊乱,新生血管增多,粘多糖(glycosaminoglycan,GAG)聚积,出现软骨样细胞,钙化组织形成。在此模型基础上,将PRP经皮注射入肌腱病区域,发现肌腱病早期注射PRP可以显著抑制肌腱病的发展,促进受损肌腱的修复;晚期软骨样组织形成后,PRP注射治疗没有明显改善肌腱修复。进一步,我们将肌腱病晚期形成的软骨样组织手术切除后,将PRP植入肌腱缺损处,发现PRP促进了肌腱修复。结果提示在肌腱病晚期,建议将非腱性组织切除后植入PRP。最后,体外和体内研究Toradol治疗肌腱病的结果表明,Toradol抑制肌腱细胞增殖,高浓度下对肌腱细胞有明显毒性作用,注射入肌腱组织会破坏肌纤维结构,诱导TSCs向脂肪系细胞分化。结论:KGN在体外能促进TSCs向软骨细胞分化,体内可诱导肌腱病发生;PRP经皮注射在早期可预防肌腱病发生和促进受损肌腱的修复,晚期无明显治疗作用;肌腱病晚期,手术切除肌腱组织内软骨样或骨样组织后植入PRP,可以促进肌腱修复;临床上常用的Toradol对肌腱细胞和肌腱组织有破坏作用。目的:脑卒中是由于脑部供血受阻而迅速发展成的脑功能损伤。诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)体外诱导分化为神经干细胞(neural stem cells,NSCs)是细胞移植治疗脑卒中的良好的细胞来源。本实验将iPSCs来源的NSCs移植修复大脑中动脉栓塞后神经功能受损的大鼠模型,探讨其对受损脑组织的修复和神经功能的恢复机制和作用。方法:体外用RA和无血清培养基诱导iPSCs和ESCs向NSCs分化。诱导成功后,全麻下从大鼠颈外动脉切口将4-0尼龙线插入180mm-200mm至颈内动脉,直到栓塞大脑中动脉,建立MCAO模型。将CM-Di I标记的NSCs注射入纹状体,与假手术组和PBS注射相比较,观察细胞在体内的存活,迁移和分化。并评估NSCs注射后对大鼠神经功能的恢复作用。结果:iPS-S-01和Hu ES1表达高水平的Oct4,Sox2和Nanog。iPSC来源NSC和ESC来源的NSC均表达Nestin,β-tubulin and GFAP。细胞移植7天后,纹状体周围可见CM-DiI标记细胞(68.2±2.3 count/field)。免疫细胞化学染色结果显示,移植7天的标记细胞表达Nestin(68.5±2.8%),和β-tubullin(25.7±12.3%)。移植后3周,细胞移植组的神经功能恢复显著高于对照组。结论:RA联合无血清培养基可诱导iPSC向NSC分化,是一种稳定且有效的诱导方法。将诱导的NSCs植入脑卒中大鼠模型,移植的细胞可以在体内存活,迁移,分化为神经细胞,并且能改善受损神经的功能。