目的:近年来,随着EGFR功能的发现和酪氨酸激酶抑制剂的更新换代,针对EGFR抗肿瘤的靶向药物药效明确,已在临床获得广泛应用。但是由于肿瘤细胞在病情发生进展时,EGFR基因的突变情况也会随之改变,限制了药物的使用和功能发挥。本课题旨在通过多肽合成的方法,筛选能够竞争性拮抗EGF同时靶向EGFR的新型多肽MM2,并研究其抗肿瘤作用。课题组前期研究发现左金丸能够抑制EGFR信号通路下游PI3k的激活,增强化疗药物的疗效。本课题旨在研究左金丸与MM2联用,对大肠癌抑制作用及作用机制。方法:1.利用One Bead–One Compound Cyclic-Peptide方法以Tenta Gel树脂为基础,在常温下用分割法合成新型多肽。2.通过免疫荧光法筛选出能与EGFR结合的多肽。3.通过荧光偏振技术检测多肽与EGFR蛋白之间的的亲和力。4.通过皮下注射HCT-8细胞的方法构建小鼠皮下移植瘤模型,定期测量瘤体体积裸鼠体重,观察多肽药物MM2及MM2联合左金丸对小鼠生活质量以及瘤体生长情况的影响。5.运用westernblot方法检测肿瘤细胞和中合成多肽MM2对EGFR磷酸化的调控作用以及MM2对EGFR下游基因Ak T、ERK磷酸化的影响。6.利用CCK-8细胞活性检测技术及肿瘤细胞单克隆技术研究MM2及MM2联合左金丸对大肠癌细胞增殖的影响。7.通过Transwell和细胞划痕实验检测MM2及MM2联和左金丸对大肠癌细胞侵袭和迁移的影响。结果:通过固相合成法获得新型多肽MM2,其可与EGFR特异性结合并抑制EGFR及其下游基因AKT和ERK的磷酸化;MM2可以抑制KRAS野生型大肠癌细胞的增殖;MM2可抑制大肠癌细胞的侵袭和转移能力。肿瘤大小统计数据显示,MM2明显抑制了大肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤的增长,在联用左金丸之后,其抑瘤作用进一步增强,提高了MM2对大肠癌的抑制作用。左金丸联合MM2能够降低EGFR相关下游基因AKT和ERK的磷酸化。结论:One-Bead–One Compound Cyclic-Peptide是一种稳定高效的化学合成多肽的方法,筛选到了能与EGFR特异性结合的新型多肽MM2。MM2通过抑制EGFR的磷酸化,阻止其下游PI3K-AKT和MAPK/ERK信号通路的传导,抑制了大肠癌的增殖以及侵袭转移。同时发现左金丸和MM2联合使用之后,增强了MM2的抗肿瘤效应。