由于土壤真菌能够产生丰富多样的具有多种生物活性的次生代谢产物,在自然界中具有重要的生态学作用,已在全世界范围内得到广泛关注并取得了极大进展。目前,有关链格孢菌(Alternaria alternata)次生代谢产物结构及其活性的研究国内外相关报道很少。本人所在实验室前期采集分离鉴定链格孢菌泰山变种(本研究所提到的“链格孢菌泰山变种”均为暂定名),并证明其发酵液有促进植物生长作用。本研究在前期研究的基础上,对链格孢菌泰山变种代谢物进行分离、结构鉴定和一系列活性试验,为发酵液中代谢产物在促进植物生长、提高植物抗逆性等方面提供了理论和应用基础。本研究通过培养链格孢菌泰山变种独立菌株,优化发酵条件,得到其代谢产物;并采用分离纯化与生物活性追踪相结合的方式,通过对代谢产物进行一系列分离纯化,柱层析分离法得到代谢物粗品;再进一步进行制备型高效液相色谱制备,得到代谢产物-TS001;最后用超高分辨液质联用(HPLC-MS)及核磁共振法(NMR)进行结构鉴定。得出的主要结果为:1、最优发酵条件:培养基组分为蛋白胨5g/L,葡萄糖20g/L,酵母粉2g/L,磷酸氢二钾1g/L,硫酸镁0.5g/L,孟加拉红0.1g/L,最适培养温度为27℃。2、代谢物粗品的制备:在柱层析条件为填充物200-300目层析硅胶,溶剂为乙酸乙酯,洗脱剂为乙酸乙酯:甲醇=20:1,将提取出来的发酵液混合物加入层析柱,收集流出液,旋转蒸发仪中减压蒸发至干、浓缩得到抗生素粗品。粗品提取率为1.5‰。3、TS001分离、鉴定:在柱层析分离后,天然产物得到初步分离,在高效液相色谱分析中可以准确看到粗提取物中含有三个主要成分,保留时间分别是1.004min、4.727min、7.939min,结合实验室前期研究以及相关文献数据表明,保留时间为1.004min的是溶剂峰,经HPLC-MS以及NMR分析后,得到保留时间为4.727min的物质为已知物,保留时间为7.939min的物质分子量为610.19434,使用高效制备液相进行制备,得到新化合物TS-001,具体结构还需进一步分析。4、代谢物、粗提物和TS001生物活性以及对环境生物安全性:(1)对黄瓜的生长和促进作用:以经不同分离阶段物质处理后,相同浓度下,黄瓜幼苗的株高、根长、茎重、根重、茎粗均未出现较大变动,各浓度条件下对黄瓜幼苗的生长均呈现促进作用,在一定范围内,随浓度的升高,促进作用有所增强。其中发酵液1000倍促进作用最好,纯品8000倍促进作用较差。(2)对黄瓜体内生化指标的影响:代谢物和TS001处理黄瓜,对其体内PPO、POD、SOD、PAL活性均有促进和诱导效应,在各浓度条件下其活性均有所提高,在一定浓度范围内,各酶活性随浓度的增加,酶活性升高,其中经发酵液1000倍处理的黄花幼苗各酶活性最高,经纯品8000倍处理的黄瓜幼苗各酶活性最低。以上结果说明在发酵液中确实存在促进黄瓜幼苗生长的次生代谢物质。(3)发酵液对环境生物的安全性影响:对比发酵液、粗提物及TS-001与其他6种农药制剂对松毛虫赤眼蜂的急性毒性,结果表明,发酵液及TS-001对环境生物松毛虫赤眼蜂无毒性,安全性高。