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背景视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤,占所有儿童恶性肿瘤的3%,具有家族遗传倾向,可单眼、双眼或者同时发病。其临床表现复杂,可表现为瞳孔散大、白瞳症、斜视等。同时,视网膜母细胞瘤可造成眼底的改变,严重时向远处转移,危及生命。视网膜母细胞瘤的治疗方法包括:局部治疗(放疗、玻璃体内注射治疗、眼动脉介入治疗、冷冻、激光光凝等)、化学治疗、手术治疗和基因治疗等。在发达国家,早期诊断和综合治疗方法已经可能完全治愈视网膜母细胞瘤,但是仍对视力造成了严重的损害。而在发展中国家其治愈率依旧极低。目前治疗中常用的化疗药物存在着靶点单一、全身毒副作用大等缺点。基因药物中最常用的是小干扰RNA,然而小干扰RNA存在着易降解、不易被细胞内化吸收等缺点。由于上述治疗中存在的问题导致视网膜母细胞瘤的治疗效果欠佳,因此迫切需要寻找新的治疗策略。近年来,聚合物胶束作为一种新型的纳米载体被广泛用于肿瘤的治疗中。聚合物纳米载体可以用来负载化疗药物和基因药物,以提高药物在肿瘤部位的富集程度,达到实现肿瘤靶向治疗的效果,并降低对正常组织或细胞的毒副作用。目的探讨聚合物纳米胶束联合传输化疗药物和基因药物作用视网膜母细胞瘤细胞,观察药物对视网膜母细胞瘤细胞的协同抑制作用,研究药物对肿瘤血管生成的作用机制。方法先前研究中我们已经合成了一种新型的阳离子三嵌段共聚物,聚(乙二醇)-聚(ε-己内酯)-g-聚乙烯亚胺(PEG-PCL-g-PEI,缩写为PCI),制备负载雷公藤红素和siRNA的聚合物,Nano-ZSE电位及粒度测定仪检测电位和粒径变化;琼脂糖电泳凝胶试验检测聚合物对核酸的复合能力;采用细胞摄取实验检测聚合物高效的生物利用度;CCK8法检测人Y79细胞和人EA.hy926细胞增殖;采用划痕实验、侵袭实验检测EA.hy926细胞迁移和侵袭能力;并通过蛋白免疫印迹法Western blot检测HIF-1α及HIF-1α/VEGF/VEGFR通路相关分子表达的变化。结果本研究中通过使用聚合物纳米胶束联合传输雷公藤红素和HIF-1αsiRNA调控HIF-1α/VEGF抑制人视网膜母细胞瘤细胞血管生成,达到协同抑制肿瘤细胞的效果。先前的研究中已证实制备的正离子纳米胶束呈球形,大小均一、平均粒径为24 nm,表面电位为+8.5 m V,药物释放实验检测发现雷公藤红素早期的释放呈暴释,后期呈缓慢释放,并且随着p H降低释放速率加快。琼脂糖电泳凝胶结果表明该胶束可以有效负载带负电的siRNA,同时发现随着二者氮磷比的增加,聚合物胶束能完全包裹siRNA;细胞摄取结果表明负载雷公藤红素的聚合物胶束可以高效地进入到人视网膜母细胞瘤细胞(Y79细胞)并且从胞浆中快速释放出雷公藤红素达到抗肿瘤的效果;CCK8细胞增殖实验检测人Y79细胞和人EA.hy926细胞增殖,结果表明负载雷公藤红素的聚合物胶束降低了Y79细胞的活力,抑制了Y79细胞的增殖,而空白胶束则对Y79细胞的增殖没有影响,表明聚合物胶束本身是对细胞无毒性作用的;而在人Y79细胞和人EA.hy926细胞共培养体系中,结果显示现用雷公藤红素预处理Y79细胞后,Y79细胞对EA.hy926细胞有抑制作用,能抑制血管内皮细胞的增殖;Western blot检测通过联合传输雷公藤红素和HIF-1αsiRNA作用Y79细胞,结果显示Y79细胞中HIF-1α、VEGFA的表达都降低,尤其二者协同作用HIF-1α表达下调更显著;划痕实验、侵袭实验结果显示,共培养Y79细胞和EA.hy926细胞,发现Y79细胞对血管内皮细胞有抑制作用,能抑制血管内皮细胞的迁移、侵袭;同时Western blot结果表明,雷公藤红素预处理Y79细胞,肿瘤细胞能下调血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR1和VEGFR2)的表达;同时发现雷公藤红素也能下调VEGFR1和VEGFR2受体的表达。结论1、聚合物胶束载体可将雷公藤红素和HIF-1αsiRNA共同传输至肿瘤细胞,并能有效抑制Y79细胞HIF-1α和VEGFA表达。2、雷公藤红素不仅直接抑制肿瘤细胞增殖,同时还可以通过调节肿瘤细胞抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和侵袭。3、雷公藤红素不仅可以直接下调血管内皮细胞生长因子受体的表达,还可以通过作用肿瘤细胞下调血管内皮细胞生长因子受体的表达。4、雷公藤红素对肿瘤血管生成的抑制作用可能是通过HIF-1α/VEGF/VEGFR通道发挥作用的。5、本研究为化疗药物和基因药物联合治疗视网膜母细胞瘤提供了依据。