目的:探讨体外定向诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESC)分化为汗腺细胞的条件，为汗腺修复机制的研究奠定基础。 方法:1．小鼠胚胎干细胞的体外分离、培养、传代和鉴定取12.5～14.5胎龄的胎鼠去除头、尾、四肢后，剪碎组织块胰蛋白酶消化，离心去上清即分离获得原代成纤维细胞，培养3d后传代。采用20μg/mL丝裂霉素C处理胚鼠成纤维细胞2～4h后制备出胚胎干细胞的滋养层细胞。取BALB/C小鼠3.5d囊胚，接种于滋养层细胞上，培养5～6d后挑取胚胎干细胞集落，胰酶消化传代。观察细胞集落生长情况，碱性磷酸酶染色、细胞核型分析等对细胞进行鉴定。2．人汗腺细胞的体外分离、培养、传代和鉴定：取患者腹部全层皮肤，剪碎后胶原酶消化，置培养箱中培养。24h后在清洁的、紫外线消毒的50×倒置显微镜下用40μl微量移液器吸取汗腺腺体于另一盛有Hank’s的培养皿中，待汗腺贴壁后，补加约2ml汗腺培养基继续培养，每隔2～3d换液，待汗腺细胞约80％融合后，按1：2传代培养。用免疫细胞化学染色法检测汗腺细胞内CK19和CEA的表达。3．诱导ES细胞的实验分组：条件培养基组为含30％汗腺细胞匀浆液的条件培养基诱导ES细胞4h后被去除，再加入诱导培养基培养；对照组为只加诱导培养基。两组细胞诱导14天后，免疫组织化学染色法检测诱导后的细胞内CK19和CEA的表达。流式细胞学检测诱导后两组中表达CK19和CEA的阳性细胞率。 结果:1．ES细胞呈集落性生长；碱性磷酸酶组织化学染色阳性；具有正常核型。2．可见上皮细胞从腺体中爬出，呈多边形，持续分裂，在原来单层基础上继续生长为多层，如“铺路石”样，相差显微镜下观察原代培养的汗腺为混合形态的上皮细胞。3．免疫组织化学染色结果显示，条件培养基组细胞表达CK19和CEA均为阳性；流式细胞学检测，条件培养基组ESCs中CKl9阳性率为10.44％，CEA阳性率为6.33％，较对照组CK19阳性率1.38％，CEA阳性率1.49％明显升高(p≤0.05)，差异均有统计学意义。 结论:1．在体外培养的ES细胞生长稳定，传代后仍保持未分化状态，具有未分化潜能；2体外培养的汗腺细胞传代后CK19、CEA免疫细胞化学染色为阳性，仍保持上皮细胞未分化标记；3．构建模拟胚胎期汗腺发生的细胞模型，模型反映了汗腺的发生过程，为进一步研究汗腺重建奠定基础。