【摘 要】
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[目 的]动、静脉的分子指纹EphrinB2、EphB4可互为配体激活对方,通过ERK1/2信号通路调节上游关键因子VEGF的表达及内皮细胞修复,从血管重塑的始动阶段维持动脉结构及功能的稳态,可能是抑制动脉负性重塑的核心机制。拟从“动、静脉分子水平差异”入手,在细胞层面探讨VEGF-ERK1/2对动脉分子指纹EphrinB2表达调控,为“维持动脉稳态”提供细胞学依据,为抑制动脉损伤后负性重塑提供新
【基金项目】
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云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项资金项目(2017FE467（-129）；
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[目 的]动、静脉的分子指纹EphrinB2、EphB4可互为配体激活对方,通过ERK1/2信号通路调节上游关键因子VEGF的表达及内皮细胞修复,从血管重塑的始动阶段维持动脉结构及功能的稳态,可能是抑制动脉负性重塑的核心机制。拟从“动、静脉分子水平差异”入手,在细胞层面探讨VEGF-ERK1/2对动脉分子指纹EphrinB2表达调控,为“维持动脉稳态”提供细胞学依据,为抑制动脉损伤后负性重塑提供新靶点。[方 法]1.体外培养野生型动脉内皮细胞（EphrinB2+/+组）及EphrinB2沉默型动脉内皮细胞（EphrinB2+/-组）,筛选EphB4-Fc最适作用条件。分别刺激两组细胞,比较两组细胞增殖、迁移的异同,qPCR方法分别检测两组VEGF、VEGFR2 mRNA 表达,Western Blot 检测 p-EphrinB2、VEGF、VEGFR2、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达,分析EphrinB2表达量的不同引起VEGF、ERK1/2的变化情况;2.阻断ERK1/2通路,比较两组细胞生物学行为变化、EphrinB2、VEGF、VEGFR2 mRNA以及蛋白表达差异免疫荧光对EphrinB2、EphB4进行定位分析。[结 果]1.EphrinB2+/+组在EphB4-Fc刺激下,细胞增殖及迁移能力增强,VEGF、VEGF mRNA 水平上调,p-EphrinB2、VEGF、VEGFR2、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达上调,而EphrinB2+/-组相关转录水平及蛋白表达下降,细胞增殖及迁移能力减弱。2.ERK1/2通路阻断后,细胞增殖及迁移能力减弱,EphrinB2、VEGF、VEGFR2 mRNA以及蛋白表达下调,但p-EphrinB2未见明显变化。免疫荧光双染色显示,ECa中EphrinB2有阳性表达,定位胞质,EphB4无表达。[结 论]动脉分子指纹EphrinB2可能是调控动脉内膜增生的核心因子,通过VEGF-ERK1/2通路调控EphrinB2的表达,进一步调节内皮细胞功能,维持动脉“属性”的完整,可能是抑制动脉负性重塑的核心机制之一。
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