盐碱地是巨大的潜在资源,绿化盐碱地是扩大耕地面积,进一步发展农业生产、改善生态环境的重要措施。利用基因工程手段培育能在盐碱地上种植的植物,是利用盐碱地的一条经济而有效的途径。HAL1基因是酿酒酵母中的重要耐盐因子,其表达参与调节细胞内离子浓度。尽管HAL1基因本身不是转运蛋白,但在盐胁迫下能与ENA1基因协同作用促进Na⁺外排,与其它转运系统协同作用增加K⁺的吸收,保持细胞内低的Na⁺/K⁺比,以减轻Na⁺毒害,因而在植物耐盐基因工程上具有很大的潜力。本研究首先将耐盐基因HAL1导入根癌农杆菌菌株LBA4404和C₅₈C₁中,然后用农杆菌介导的叶盘法将HAL1基因转入模式植物烟草,探索农杆菌介导的遗传转化条件及其影响因素,并对转基因烟草的耐盐性进行评价。主要研究结果如下:1.将含有目的基因的质粒ProkⅡ导入根癌农杆菌LBA4404和C58C1中。两个菌株均以70mmo/LCaCl₂为转化溶液,OD600为0.5～0.6的YEB培养基制备的感受态细胞最佳。LBA4404感受态细胞和10ng质粒DNA于0℃共放置30min,液氮速冻5min,37℃热激5min时转化率最高,达1.4×10⁵转化子/μgDNA。C58C1感受态细胞和20ng质粒DNA于0℃共放置10min,液氮速冻1min,37℃热激1min转化率最高,达1.33×105转化子/μgDNA。2.以烟草为实验材料,建立了较为理想的再生体系。秦选1号以MS⁺6-BA 2.0mg/L⁺NAA0.4mg/L,秦烟95以MS⁺6-BA1.0mg/L⁺NAA0.1mg/L作为遗传转化时愈伤组织诱导及芽分化培养基。经Kan梯度筛选试验,以20mg/L和30mg/LKan分别作为秦选1号和秦烟95抗性芽的筛选浓度。以20mg/LKan作为两者转化植株生根时的筛选浓度。3.优化了HAL1基因转化烟草遗传体系。取40～60d叶龄的秦选1号再生苗叶圆片不进行预培养,用携带目的基因的LBA4404农杆菌菌液稀释100×,浸泡1min来进行转化。外植体与农杆菌共培养2d后用灭菌蒸馏水充分冲洗,然后于2%的NaClO中浸泡15min,用灭菌蒸馏水冲洗4～5次,置800mg/L Cb⁺0.1%的甘露醇中浸泡约12h来进行除菌。采用早期筛选和后期筛选获得了Kan抗性植株。4.经PCR扩增检测有6个获得约900 bp的特异性扩增谱带,初步证明HAL1基因