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猪繁殖与呼吸综合症病病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪链球菌2型（SS2）这三种病原体每年均能给养猪产业造成难以估量的经济损失。由于这三种病原体均能引起感染猪的呼吸道症状，且临床发病症状极为相似，难以通过临床诊断进行确诊。因此，对这三种病原体引起的疾病进行早期鉴别诊断，进而指导养殖户采取有效的控制措施显得尤为重要。本试验根据Gene Bank中发布的PRRSV的nsp2基因、PCV2的全基因和SS2的16s rRNA基因序列，分别找出其保守区并设计了三对特异性引物。建立并分别进行了优化检测PRRSV、PCV2和SS2三种病原体的单重PCR方法和多重PCR方法。三种病原体的单重PCR检测方法的反应条件中退火温度均确定为51.9℃，循环数的结果选定为35个循环；其中PCV2和SS2的单重PCR反应体系中（25μL体系）dNTP（2.5mM）加入量均确定为3μL，引物（10μmol/L）加入量均确定为0.7μL；PRRSV的单重PCR反应体系中（50μL体系）Mg2+(25mM)加入量确定为8μL，dNTP（10mM）加入量确定为5μL，引物（10μmol/L）加入量均确定为2μL。本试验建立的单重PCR法具有较高的敏感性（可以检测到的PRRSV，PCV2以及SS2的最低含量分别为1.37pg，3.35pg和5.23pg）。三种病原体的多重PCR检测方法的反应条件中退火温度均确定为51.9℃，Mg2+(25mM)加入量确定为8μL，dNTP（10mM）加入量确定为6μL，引物（10μmol/L）加入量均确定为2.3μL，循环数的结果判定为35个循环。多重PCR法不仅有高特异性，并且有较高的敏感度（可以检测到PRRSV，PCV2以及SS2的最低含量分别为13.7pg，33.5pg和52.3pg）。在2012年9月份到2013年12月份之间，利用本试验所建立的PRRSV、PCV2以及SS2三种病原体的多重PCR法对收集的河北省保定、石家庄、邯郸、邢台、沧州、承德、张家口、衡水、廊坊、唐山、秦皇岛等11个地区的412份临床症状疑似呼吸道疾病的组织样品进行了检测，PRRSV，PCV2和SS2总阳性率分别为42.7%，26.5%和44.7%。对病料进行PRRSV、PCV2和SS2混合感染的检测，结果显示PRRSV和SS2混合感染的总阳性率为11.2%，PCV2和PRRSV混合感染的总阳性率为15.0%，PCV2和SS2混合感染的总阳性率为12.4%。结果表明PRRSV、PCV2以及SS2的感染普遍存在于河北省地区的猪群当中。