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在一些恶性肿瘤,如非小细胞肺癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌中,出现EGFR突变、异常表达或高表达的情况,参与癌症的发生和发展。基于正常人表皮细胞和基质细胞的EGFR表达水平和癌细胞表面的EGFR表达水平的差异,EGFR受体家族被认为是抗肿瘤药物研发的重要靶标,针对EGFR受体体家族设计靶向药物输送系统。Cetuximab(西妥昔单克隆抗体,商品名:爱必妥)是默克公司研制,于2006年3月FDA批准上市的单克隆抗体药物,与化疗药物联合应用于结肠癌、非小细胞肺癌以及头颈癌的治疗,临床效果显著。本课题旨在制备Cetuximab单链抗体介导的靶向EGFR的免疫脂质体和脂质基因输送载体,实现药物(小分子药物、siRNA/DNA)的靶向输送。我们首先构建了Cetu-scFv的原核表达系BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL/pET-20b(+)/Cetu-scFv,并在构建前期,为了实现其偶联脂质体和蛋白纯化方法的目的,对其序列进行修饰,即在Cetu-scFv碱基序列的N端连接6*His Tag,C端连接半胱氨酸。然后经过细菌培养、IPTG诱导,破菌粗提得到蛋白粗提液,经过Ni柱亲和纯化和分子筛层析,得到纯度大于90%,且和EGFR高表达细胞A549结合效果较好的目的蛋白Cetu-scFv。由于Cetu-scFv氨基酸序列的C端连接了一个半胱氨酸,可以和脂质材料DSPE-PEG2k-MAL中的活性基团马来酰亚胺反应形成硫醚键,制备Cetu-scFv偶联的靶向阿霉素脂质体和靶向DNA/lipoplex阳离子脂质复合物。实验结果显示,包载阿霉素的脂质体和包载pGL3-luciferase质粒的阳离子脂质复合物在Cetu-scFv的介导下,相对比非靶向组,对A549细胞有更好的结合效果。而且,我们还通过CCK8细胞毒性实验检测了Cetu-scFv介导的靶向阿霉素脂质体和非靶向阿霉素脂质体组对A549细胞的体外药效差异,实验结果显示,当阿霉素给药剂量大于3ug/ml(3-100ug/ml)时,靶向阿霉素脂质体对A549细胞有更显著的生长抑制效果,两者有显著性差异;此外,通过体外转染DNA/lipoplex阳离子脂质复合物实验发现,在Cetu-scFv的介导下,靶向组比非靶向组的转染效果更好。综上,我们成功制备了Cetu-scFv介导的靶向EGFR的阿霉素脂质体和DNA/lipoplex阳离子脂质复合物,通过单链抗体的介导,实现了提高靶向药物输送的目的。在接下来的实验中,我们将进一步提高DNA/lipoplex阳离子脂质复合物的转染效果,并考察靶向阿霉素脂质体和靶向DNA/lipoplex阳离子脂质复合物的体内药效。