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将鸡大肝大脾病（Big Liver and Spleen Disease，BLS）阳性病料制成20％的PBS匀浆，分别经过低速、高速离心纯化处理，静脉接种25周龄的从肉用种鸡，并采用琼脂扩散试验对血清的抗原及抗体进行检测与分析。接种后人工感染鸡出现BLS典型的血清学反应，表明在肉用种鸡体内复制BLS病原获得了成功。 根据已报道的鸡大肝大脾病毒（Big Liver and Spleen Disease Virus，BLSV）基因序列，自行设计和合成了一对引物，应用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）技术，从人工接种发病的AA肉用种鸡肝脏组织中扩增出片段大小为375bp的病毒基因，将扩增的片段克隆到pMD18-T载体，经酶切鉴定及DNA序列测定，表明扩增片段为BLSV基因。该部分基因与澳大利亚报道的BLSV的核苷酸同派性为97.5％，与Genbank中禽的戊型肝炎病毒的核苷酸同源性为84％。 根据已报道的BLSV基因序列，自行设计和合成了一对可扩增长度为375bp目的片段的引物，建立了检测BLSV的RT-PCR方法，并对南京两个鸡场发病鸡群进行BLSV的检测。PCR检测的灵敏度可用于4.16×10-3μg/μL的模板DNA，表明RT-PCR法可在分子水平快速、特异地检测BLSV。其中某鸡场的阳性检出率为1/10，该毒株定名为BLSV-NJ2002；另一鸡场未查出BLSV。证实南京地区已存在BLSV阳性鸡群，375bp的病毒基因的序列分析表明，分离株BLSV-NJ2002与本实验室保存的BLSV-SD1995毒株的核苷酸同源性为99.5％，与澳大利亚报道的BLSV的核苷酸同源性为97.3％。