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研究目的:本课题组前期研究发现小鼠神阙穴及其周围穴位处分布有团块状的脂肪组织。经染色表明其中心为脂肪组织,四周被结缔组织包绕。免疫组化染色发现这些脂肪组织内含有Sca-1阳性细胞,其分布与小鼠神阙、任脉、带脉解剖定位一致。本研究将神阙穴脂肪组织与腹股沟普通脂肪组织进行形态学和Sca-1阳性细胞含量比较,判断神阙穴脂肪团是否有一定的特殊性。然后制备一种简单并且典型的动物疾病模型,模拟神阙穴敷贴疗法,在动物水平研究神阙穴脂肪团与神阙穴敷贴治疗发热这一功能之间的关系,初步探讨神阙穴脂肪组织在经神阙穴治疗相关疾病过程中所起的作用。进一步将神阙穴脂肪组织中多潜能干细胞分离、培养和鉴定。将神阙穴富含Sca-1阳性多潜能干细胞的脂肪团与神阙穴功能之间的关系进行初步探索,为中医穴位治疗机制研究的新方向提供一定的实验基础。研究方法:用免疫组化的方法分别将神阙穴脂肪团组织和腹股沟普通脂肪组织染色,对二者的形态学和Sca-1阳性细胞的相对含量进行比较;采用腹腔注射LPS的方法制备小鼠发热的模型,模拟中医穴位敷贴疗法在小鼠神阙穴敷贴退热贴治疗发热,共设6个分组:腹腔注射生理盐水对照组,腹腔注射LPS组,腹腔注射LPS后神阙穴敷贴退热贴治疗组,预先手术切除神阙穴脂肪团后腹腔注射LPS再行神阙穴敷贴退热贴治疗组,腹腔注射LPS后神阙穴敷贴创可贴对照组,腹腔注射LPS后神阙穴敷贴医用胶带对照组,研究神阙穴脂肪团与神阙穴的功能间的关系;显微镜下剥离神阙穴脂肪团,组织块贴壁培养法培养多潜能干细胞。流式细胞仪对培养细胞进行表面标记物分析。配制诱导分化培养基对培养的干细胞分别进行成脂肪、成骨诱导分化和鉴定,成脂肪分化后胞浆中的脂滴用油红O染色,成骨后形成的钙盐沉积用茜素红染色。实验结果及结论:1.小鼠神阙穴脂肪团较普通的腹股沟脂肪组织结构更致密,细胞含量多,富含Sca-1阳性细胞。2.LPS可以诱导小鼠发热,热型稳定,具有自限性。发热小鼠经神阙穴敷贴退热贴治疗后,体温下降到正常水平。而手术去除神阙穴脂肪团后再行神阙穴敷贴退热贴治疗组和神阙穴敷贴云南白药创可贴治疗组则体温与腹腔注射LPS对照组的趋势相同,没有下降。说明神阙穴脂肪团在经神阙穴敷贴退热贴治疗发热过程中有很重要的作用。3.神阙穴脂肪组织中可以提取出多潜能干细胞。这些干细胞阳性表达Sca-1、CD105、CD44,阴性表达CD31、CD45、CD34、C D166。经成脂肪和成骨诱导分化证明,神阙穴多潜能干细胞具备干细胞独特的可塑性,可进行多向分化。